[发明专利]校正质谱检测微生物样品的准确率的方法及产品

权利要求书

1.一种可提高质谱检测生物靶分子的准确率的质谱校正方法，步骤包括：

(1)配制基质溶液，并配置生物靶分子样本以及校正样本UEP的溶液；

(2)分别在亲水区域定位孔、中心校正孔以及验证校正孔，点0.5-1μL基质溶液，自然挥干后形成一次结晶；

(3)在亲水区域定位孔，在一次结晶表面，点0.5-1μL生物靶分子样本，自然挥干后形成二次结晶；

(4)分别在中心校正孔、验证校正孔，在一次结晶表面，点0.5-1μL校正样本UEP，自然挥干后形成二次结晶；

(5)通过激光飞行时间质谱分别轰击中心校正孔位、验证校正孔的校正样本UEP，获得多个UEP峰分子量的谱图；

(6)当至少60％的UEP峰分子量偏差小于700PPM，即为校正有效

(7)校正成功后，即可对亲水区域定位孔的待测生物靶分子样本进行质谱检测。

其中，步骤(1)中将乙腈水溶液中以1-10：100(mg/ml)的比例，加入3-羟基-2-吡啶甲酸充分溶解得到混合液，随后将3-羟基-2-吡啶甲酸溶液和柠檬酸二胺溶液，按照1-3:1体积比混合均匀，过滤即得基质溶液。

2.权利要求1的方法，其中选取0.75μL基质溶液和0.5μL靶分子样本或标准样本溶液进行结晶。

3.权利要求2的方法，其中所述校正样本UEP是标准菌株8739溶液。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述质谱的参数设置如下：

Turing mode:linear；

Mass Range:2000-20000；

Max Laser Rep Rate:20.0；

Power:65；

Profiles:100；

Shots:5。

5.权利要求5的方法，其中MALDI-TOF质谱是CLIN-TOF-II飞行时间质谱。

6.权利要求1-5的方法中所用的能够提高质谱检测生物靶分子的准确率的质谱芯片，该芯片包括：由硅材料或玻璃或钛合金组成的芯片主体，其表面具有多个竖直交叉排列的亲水区域定位孔、疏水孔外区域、中心校正孔、验证校正孔、备用校正孔；

其中，定位孔具有亲水特性，用于滴定基质溶液或样本；疏水孔外区域，表面具有疏水特性；定位孔和孔外区域形成的微阵列芯片表面亲疏水间隔的结构，可以辅助液体样本收缩凝聚在亲水区域内，使样本结晶集中，且呈现标准圆形，提高离子化效率；

中心校正孔和验证校正孔，用于校正微生物标准的滴定位置验证校正孔，用来验证校正效果；

备用校正孔，作为备用，中心校正孔或验证校正孔如果出现异常，可用备用校正孔。

7.权利要求6的方法，其中定位孔在芯片上为(4-8)×(4-8)的竖直交叉方向排列，中心校正孔、验证校正孔以及备用校正孔在芯片中间位置竖向排列，数量均为1或2个。

8.权利要求7的方法，其中所述芯片亲水性定位孔覆盖150-800nm的亲水性薄膜，疏水性孔外区覆盖150nm-2μm疏水性薄膜，其表面水滴接触角＞120°。

9.权利要求8的方法，其中所述亲水性薄膜为二氧化硅氧化物薄膜、氧化锌薄膜、氧化铝薄膜等，疏水性孔外区通过硅烷偶联剂进行处理形成疏水性薄膜。

10.权利要求8的方法，其中所述硅烷偶联剂选自乙烯基硅烷、氨基硅烷或二甲基二氯硅烷。