[发明专利]一种高载量金属螯合亲和层析介质

说明书

本案涉及高载量金属螯合亲和层析介质，以硅胶微球为内核，所述硅胶微球设有孔道，在硅胶微球表面及孔道内附着有羧甲基壳寡糖分子，羧甲基壳寡糖分子一部分络合有第一金属离子以形成第一层金属螯合，剩余部分键合有烯丙基缩水甘油醚，烯丙基缩水甘油醚连接有配基，配基络合有第二金属离子以形成第二层金属螯合；本发明成功地在介质表面固载了双金属层，有效提高了金属亲和层析介质的固载量，这种改进方法简单，生产成本低，利于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及一种层析介质，具体涉及一种高载量金属螯合亲和层析介质。

背景技术

蛋白质的高效分离纯化是生物制药、基因工程、生命科学研究等顺利开展的前提和基础，根据蛋白质自身的尺寸大小不同、溶解能力及所带电荷数的不同，纯化蛋白质的方法也不尽相同。其中，金属螯合亲和层析技术是基于蛋白质表面的一些氨基酸残基与固定化金属离子的亲和力不同而对蛋白质进行分离纯化，具有特异性强、金属离子可选择种类多、吸附目标蛋白相对稳定、层析柱可连续使用或再生等优势而日益受到人们的关注。

金属螯合亲和层析介质主要由固体基质、螯合配基和金属离子三部份构成，而且这些组成部分都会对最终层析柱吸附分离蛋白质产生不同程度的影响。评价金属螯合层析介质性能的指标有很多，如粒径及其分布、流通性能、孔道结构及载量等，其中，载量是最重要的指标之一，用以表征介质的吸附性能。高载量介质能大大增加柱承载能力，提升纯化能力，降低分离纯化成本。但是，现有金属螯合亲和层析介质的结构单一，普遍存在蛋白载量较低，分离纯化效率不高的问题。

发明内容

针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种高载量金属螯合亲和层析介质。

本发明的技术方案概述如下：

以硅胶微球为内核，所述硅胶微球设有孔道，所述硅胶微球表面及孔道内附着有羧甲基壳寡糖分子；所述羧甲基壳寡糖分子一部分络合有第一金属离子以形成第一层金属螯合，剩余部分键合有烯丙基缩水甘油醚；所述烯丙基缩水甘油醚连接有配基；所述配基络合有第二金属离子以形成第二层金属螯合。

优选的是，所述第一金属离子选自Cu²⁺、Fe³⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Co²⁺、Ca²⁺中的一种。

优选的是，所述第二金属离子选自Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Co²⁺中的一种。

优选的是，所述第二金属离子与所述第一金属离子的摩尔比为1∶8～10。

优选的是，所述羧甲基壳寡糖分子的聚合度在5～15之间。

优选的是，所述硅胶微球的粒径为30～100μm，所述孔道的平均孔径为8～12nm。

优选的是，所述配基为亚氨基二乙酸、三羟甲基乙二胺、次氨基三乙酸中的一种。