[发明专利]校正质谱检测糖基正确率的方法及产品

说明书

本发明提供了一种通过改善糖基样本二次结晶的方法，包括在乙腈水溶液中分别加入三氟乙酸溶液、DHB基质以配制基质溶液，然后加入特定比例的样本溶液在芯片上进行点样结晶。本发明还提供了提高质谱检测生物靶分子的准确率的质谱校正方法，包括在具有多个竖直交叉排列的亲水区域定位孔、疏水孔外区域、中心校正孔、验证校正孔、备用校正孔的芯片上，分别点样糖基样本结晶，点样基质溶液并结晶，并通过质谱轰击校正孔位的糖基样本，以对待测样本的质谱结果进行校正。本发明还提供了适用上述质谱校正和检测的芯片。本发明改进基质溶液配方，能够获得结晶形态较佳的一次结晶和二次结晶效果，其校正方法有助于获得更加稳定和准确的质谱检测结果。

技术领域

本发明涉及一种通过改善生物样本结晶及校正方式来提高MALDI-TOF质谱检测正确率的方法，能质谱检测糖基，属于质谱检测技术领域。

背景技术

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品前处理方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品前处理方法与合适的有机基质结合起来,才能成功实现对核酸和蛋白质等生物大分子的准确鉴定。对于基质、溶剂、盐(金属离子)和样品制备方法的选择是MALDI分析高聚物成败的关键因素。最优化的条件是使样品分子和基质均匀地形成共结晶。MALDI方法分析大分子,重要的关键之一是选择合适的基质。结果表明,效果较佳的基质只有几种。水溶性合成高分子如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇经常出现于早期的MALDI研究中,这是因为分析多肽的基质也可以应用于它们,对于另外一些高分子,可以从高分子和基质的溶解性中找到一些选择基质的思路。一般来说,选择基质时应使基质与高分子的极性比较一致,彼此之间具有兼容性。

微阵列芯片以高密度阵列为特征。微阵列技术就是利用分子杂交原理,使同时被比较的标本与微阵列杂交，通过检测杂交信号强度及数据处理，把他们转化成不同标本中特异基因的丰度，从而全面比较不同标本的基因表达水平的差异。微阵列芯片因其高度均一性，结构稳定性，样品用量少及高通量而成为芯片领域中发展最迅速的一部分。微阵列不仅仅在生物遗传领域有着广泛的用途，在其他定量和相对定量分析方面也有着潜在的用途。

微阵列芯片因其微孔尺寸相同，微孔与周围亲疏水性质的差别，较好的限制了样品所处的范围，使得所分析的区域保持一致，使定量分析成为可能。质谱成图因为其无需标记，无需分离，通过对图像的分析来进行混合物中组成物质的定量分析，使多组分的同时检测成为可能，因此利用微阵列芯片中质谱成图进行多组分的同时定量分析，是一种具有广泛应用前景的定量分析技术。微阵列芯片中质谱成图在定量分析中的应用很大程度上取决于样本结晶的均一性，由于质谱数据采集中的质量歧视，质谱图的峰高或峰面积无法作为样品的定量分析的依据，因此如何获得可靠的，稳定的定量数据就显得尤为重要。

在应用MALDI-TOF MS时，通常将生物样本与一种饱和的低分子量无机化合物溶液(称为基质)进行混合加在靶板上，待干后样本与基质共结晶后形成了以基质包裹构架的样本固体沉淀。样本基质结晶体经激光辐射，基质从激光中吸收能量，能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，使样品吸附，基质与样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，离子在加速电场下获得相同的动能，经高压加速、聚焦后进入飞行时间检测器。根据离子飞行时间的不同进行分析得出离子质荷比(m/z)和离子峰值，形成质量图谱，检测准确性高。通过软件分析比较,筛选并确定出特异性指纹图谱,从而实现对目标微生物种或菌株的区分和鉴定。MALDI-TOF MS可用于分析多种类型的样本,包括有机分子溶液、核酸、蛋白质以及整个微生物,其中基因、蛋白质和微生物是目前在临床质谱检测实验室应用最广的项目。