[发明专利]一种采用分光光度法测定婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的含量的方法

说明书

本发明公开了一种分光光度法测定婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的含量的方法，本研究利用产品中游离的左旋肉碱可与乙酰辅酶反应生成乙酰肉碱和游离的辅藤的原理，通过分光光度法检测游离的辅酶与显色液反应生成黄色物质的量，间接求出试样中左旋肉碱含量。实验结果表明：乙酰辅酶溶液的加入量为80μL，肉碱乙酰转移酶溶液的加入量为100μL反应时间为5分钟时，能够达到准确、经济、快捷的检测要求。

技术领域

本发明属于婴幼儿食品检验领域。具体涉及婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱含量的测定方法。

背景技术

左旋肉碱属条件性婴儿必须营养物质，它不仅在能量产生和脂肪代谢过程中起主要作用，而且在维持婴儿生命及促进婴幼儿发育的某些生理过程。如生酮作用、氮代谢等方面具有一定的功能。目前，文献报道中测定左旋肉碱的方法有髙效液相色谱法、HPLC-MS、毛细管电泳质谱联用法和免疫法。但HPLC、HPLC-MS、CE-MS由于仪器设备昂贵，样品处理复杂，难以在实验室中得到普遍应用。本文采用分光光度法测定乳粉中左旋肉碱含量，结果准确且操作经济、快捷。

发明内容

本文采用分光光度法测定婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的含量的方法，与离子色谱法相比，其操作简捷且结果准确，仪器易普及，适合在各食品企业推广使用。

本发明包括以下步骤：

（1）样品提取

称取混合均匀的试样，用温水溶解于100mL容量瓶中，加入10mL13%高氯酸，混合均匀后静止20min后过滤。取滤液20mL，用4mol/L KOH溶液调PH为12.5- 13.0，置于40℃水浴60min。冷却后用13%高氯酸将PH调为7.0-7.5。转入50mL容量瓶定容。混匀后置于4℃冰箱中过夜。取出放置室温，取上清液用0.45μm滤膜过滤后备用。

（2）样品测定

在412nm波长测定吸光度值，由曲线回归方程计算出待测样液中果胶含量。试样中的左旋肉碱的含量X，以质量分数mg/100g表示：，式中：

X——样品中左旋肉碱的含量，mg/100g；C——由标准曲线上查得得试样处理液浓度，μg/mL；m——试样质量，g，结果以平均值表示，结果保留小数点后两位。

附图说明

图1 左旋肉碱标准曲线。

具体实施方式

下面将详细说明本发明的具体实施方式：

1.仪器、试剂及材料：

仪器：

PH计(精度瑞士梅特勒公司)；分光光度计（普析通用，T6新悦）

试剂及材料：

13%高氯酸；10mol/L氢氧化钠溶液；4.0mol/L氢氧化钾溶液；显色储备液：分别称取50mg2-基苯甲酸、5.96gN-2- N-2-烷磺酸、185mg二水合乙二胺四乙酸二钠溶于30mL去离子水中，用1.0mol/LNaOH调PH至7.4-7.6,然后用水稀释至50mL。此液置于4℃冰箱中可保存3个月。显色液：吸取5.0mL显色储备液用水稀释至25mL，乙酰辅酶A溶液:称取20.0mg乙酰辅酶溶于2.0mL水中（现用现配）。肉碱乙酰转移酶（80U/mg；CAT）溶液：100μL CAT悬浮液，用1500rpm离心10min，弃去上层清液，沉淀用2mL水溶解（现用现配）。左旋肉碱标准储备液：称取8.0mg于干燥器中干燥2h以上的左旋肉碱，溶于水中，并定容至100mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1个月。左旋肉碱标准工作液：分别吸取左旋肉碱标准储备液0.5,1,2,3,5mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此溶液仅限当天使用。

2.方法与结果