[发明专利]胶质瘤预后标志物circ8:127890589|127890998及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的circRNA标志物、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤预后制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

脑胶质瘤是颅内最常见的恶性神经上皮细胞肿瘤，占颅内肿瘤的40.49％，是成人最常见的脑部肿瘤之一。从确诊开始，脑胶质瘤患者平均生存寿命不超过五年。目前胶质瘤的治疗技术多样，但由于肿瘤浸润侵袭速度快，以及对放化疗介导的细胞凋亡不敏感等特性，总体治疗效果不佳，复发率高，预后差，因此寻找新的治疗靶点和预后指标至关重要。目前胶质瘤诊断仍然处于以临床、病理学和影像学信息为基础的经验性阶段，而且一经诊断，绝大多数均为中晚期，术后生存率不容乐观。因此，寻找新的胶质瘤预后标志物对患者进行生存分析，以提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类不同于线性RNA，广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中的内源性封闭环状非编码RNA分子，其结构稳定，不易受RNA外切酶影响，能在转录，转录后，翻译等水平多层次调控基因表达，广泛存在于各类细胞中，脑部丰度极高。circRNA近年来已成为非编码RNA领域的新热点。随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例，并具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特征，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤患者预后的脑组织来源的CircRNA标志物circ8:127890589|127890998，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的CircRNA标志物在脑组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤预后试剂盒，能够测定脑组织中的circ8:127890589|127890998的含量。

所述的胶质瘤预后试剂盒，含有检测circ8:127890589|127890998含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤预后试剂盒，除circ8:127890589|127890998的引物外，还含有从脑组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circ8:127890589|127890998逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circ8:127890589|127890998所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNAcirc8:127890589|127890998实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。

申请人通过对30例胶质瘤患者瘤组织及14例正常人体脑组织荧光定量PCR发现circ8:127890589|127890998在两者中明显差异表达(P<0.0001)。并对接受随访的20例患者进行生存曲线分析发现胶质瘤组织来源的circRNA circ8:127890589|127890998与患者的生存率相关，其含量越高，生存率越高(P＝0.086)。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活质量，制订术后治疗方案，提高生存率，具有深远的临床意义和推广性。

附图说明

图1为实时荧光定量PCR分析circ8:127890589|127890998在正常脑组织与

胶质瘤中的表达差异；

图2为生存曲线分析胶质瘤组织来源的circ8:127890589|127890998表达高

低对胶质瘤患者的预后影响。

具体实施方式

以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

实施例1制备检测circRNA circ8:127890589|127890998表达量的试剂用于制备胶质瘤患者预后的试剂盒(50次反应)

1.RNA稳定溶液50ml

2.异丙醇100ml

3.三氯甲烷100ml