[发明专利]分泌型抗免疫检查点抗体、胞内免疫检查点抑制分子及tEGFR分子的共表达及其应用

权利要求书

1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体携带下列核酸分子：

(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子编码分泌型免疫检查点抑制分子片段；

(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默细胞內免疫检查点，

任选地，进一步携带第三核酸分子，所述第三核酸分子编码无功能EGFR。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段包括：抗免疫检查点单链抗体分子以及IgG Fc，

任选地，所述IgG Fc为IgG1Fc或IgG4Fc。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述免疫检查点包括选自PD-L1，PD-L2，CTLA4、PD-1、TIM3、BTLA、LAG-3、IRAK-M、SOCS1、A20、CBL-B的至少之一。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗PD-L1单链抗体和IgG1Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗PD-1单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗TIM3单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗LAG3单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗CTLA4单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子。

5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述沉默是通过shRNA、反义核酸、核酶、显性负突变、CRISPR-Cas9、CRISPR-Cpf1和锌指核酸酶至少之一实现的，

优选地，所述沉默是通过shRNA实现的。

6.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第一核酸分子具有SEQ ID NO：1～5所示的核苷酸序列。

7.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第二核酸分子具有SEQ ID NO：6～138所示的核苷酸序列，

任选地，所述第三核酸分子具有SEQ ID NO：139所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，进一步包括：

第一启动子，所述第一启动子与所述第一核酸分子可操作地连接；

第二启动子，所述第二启动子与所述第二核酸分子可操作地连接；以及

任选的第三启动子，所述任选的第三启动子与所述第三核酸分子可操作地连接。

9.根据权利要求8所述的表达载体，其特征在于，所述第一启动子、所述第二启动子、所述第三启动子分别独立地选自U6，H1，CMV，EF-1，LTR或RSV启动子。

10.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，所述表达载体进一步包括：

内部核糖体进入位点序列，所述内部核糖体进入位点序列设置在所述第一核酸分子与所述第三核酸分子之间，所述内部核糖体进入位点具有SEQ ID NO：140所示的核苷酸序列。

11.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，并且所述表达载体进一步包括:

第四核酸分子，所述第四核酸分子设置在所述第一核酸分子与所述第三核酸分子之间或多个所述第一核酸分子之间，并且所述第四核酸分子编码连接肽。

12.根据权利要求11所述的表达载体，其特征在于，所述连接肽具有SEQ ID NO：141～144所示的氨基酸序列。

13.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体是非致病性病毒载体。