[发明专利]分泌型抗免疫检查点抗体及tEGFR分子共表达的细胞及其应用

权利要求书

1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体携带下列核酸分子：

第一核酸分子，所述第一核酸分子编码分泌型免疫检查点抑制分子片段；

任选地，进一步携带第二核酸分子，所述第二核酸分子编码无功能EGFR。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段包括：抗免疫检查点单链抗体分子以及IgG Fc，

任选地，所述IgG Fc为IgG1Fc或IgG4Fc。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述免疫检查点包括选自PD-L1，CTLA4、PD-1、TIM3、BTLA、LAG-3的至少之一。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗PD-L1单链抗体和IgG1Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗PD-1单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗TIM3单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗LAG3单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子，

任选地，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段为抗CTLA4单链抗体和IgG4Fc融合蛋白分子。

5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第一核酸分子具有SEQ ID NO：1～5所示的核苷酸序列。

6.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第二核酸分子具有SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。

7.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，进一步包括：

第一启动子，所述第一启动子与所述第一核酸分子可操作地连接；以及

任选的第二启动子，所述任选的第二启动子与所述第二核酸分子可操作地连接。

8.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于，所述第一启动子、所述第二启动子、分别独立地选自U6，H1，CMV，EF-1，LTR或RSV启动子。

9.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括第一核酸分子、第二核酸分子，所述表达载体进一步包括：

内部核糖体进入位点序列，所述内部核糖体进入位点序列设置在所述第一核酸分子与所述第二核酸分子之间，所述内部核糖体进入位点具有SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括第一核酸分子、第二核酸分子，并且所述表达载体进一步包括:

第三核酸分子，所述第三核酸分子设置在所述第一核酸分子与所述第二核酸分子之间或多个所述第一核酸分子之间，并且所述第三核酸分子编码连接肽。

11.根据权利要求10所述的表达载体，其特征在于，所述连接肽具有SEQ ID NO：8～11所示的氨基酸序列。

12.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体是非致病性病毒载体。

13.根据权利要求12所述的表达载体，其特征在于，所述病毒载体包括选自反转录病毒载体、慢病毒载体或腺病毒相关病毒载体的至少之一。

14.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒携带具有SEQ ID NO：12～16所示的核苷酸序列的核酸。

15.一种转基因细胞，其特征在于，所述转基因细胞是通过将权利要求1～13任一项所述的表达载体或权利要求14所述的慢病毒导入受体细胞获得的。