[发明专利]具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白BTN3A3-Ig及其制备方法与应用

权利要求书

1.具有抑制肿瘤进程活性的融合蛋白，命名为BTN3A3-Ig，是将人BTN3A3与人IgG1通过连接肽连接后获得的重组蛋白，其氨基酸残基序列如序列表中的序列1所示；所述肿瘤为肿瘤相关巨噬细胞表达LSECtin且肿瘤细胞表达BTN3A3的肿瘤。

2.编码权利要求1所述的融合蛋白BTN3A3-Ig的基因，命名为融合基因BTN3A3-Ig。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：是编码序列表中序列1的DNA序列。

4.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：是序列表中序列2的DNA序列。

5.含有权利要求2-4中任一项所述融合基因BTN3A3-Ig的表达载体、转基因细胞系或宿主菌。

6.一种表达权利要求1所述融合蛋白BTN3A3-Ig的方法，包括以下步骤：

1）构建重组表达载体：将权利要求2-4中任一项提及的融合基因BTN3A3-Ig连接入表达载体中，得到含有融合基因BTN3A3-Ig的重组表达载体；

2）表达融合蛋白BTN3A3-Ig：将含有融合基因BTN3A3-Ig的重组表达载体pIRES2-EGFP-BTN3A3-Ig转化或转染宿主细胞及其后代细胞，培养重组宿主细胞，使融合基因BTN3A3-Ig获得表达；

3）纯化：对重组表达蛋白进行纯化，得到融合蛋白BTN3A3-Ig。

7.根据权利要求6所述的表达方法，其特征在于：所述步骤1）中将融合基因BTN3A3-Ig连接入载体pIRES2-EGFP中的NheⅠ和SalⅠ酶切位点之间，得到重组表达载体，命名为pIRES2-EGFP-BTN3A3-Ig。

8.根据权利要求6所述的表达方法，其特征在于：所述步骤2）中的宿主细胞为可表达外源基因的细胞；所述步骤2）中培养含有融合基因BTN3A3-Ig的重组宿主细胞的培养基为适于宿主细胞生长的培养基；所述步骤2）中含有融合基因BTN3A3-Ig的重组宿主细胞的培养条件为适于宿主细胞生长的培养条件：36.5-37.5℃培养24-120小时。

9.根据权利要求8所述的表达方法，其特征在于：所述可表达外源基因的细胞包括293T细胞、293细胞和CHO-S细胞。

10.根据权利要求8所述的表达方法，其特征在于：所述适于宿主细胞生长的培养基为无血清培养基M293TI、CD CHO或CD OptiCHO™。

11.根据权利要求8所述的表达方法，其特征在于：所述培养条件为37℃培养96小时。

12.根据权利要求6所述的表达方法，其特征在于：所述步骤3）中使用Protein GSepharose柱、Protein A/G Sepharose柱、或Protein A Sepharose柱对重组表达蛋白进行纯化。