[发明专利]食品中巴西坚果过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种检测食品中巴西坚果过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

巴西坚果营养丰富，是常见的、广泛食用的树生坚果。巴西坚果引起的过敏症状包括咽痒、唇肿、发声困难、呼吸困难、哮喘、黄斑疹等，因此巴西坚果属于食品过敏原标识管理的重要种类。目前为止国内外都没有发布巴西坚果过敏原成分的标准检测方法，国外对巴西坚果的检测通常采用一种商业化过敏原蛋白质免疫层析快速检测技术，国内对巴西坚果尚未建立任何达到行业应用水平的通用方法。这种现状已经严重影响了过敏原标识管理相关法规标准的科学有效实施。因此，在预包装食品过敏原检验技术领域，目前急需制定更加普适、简便、准确、成本低廉的巴西坚果过敏原检测方法，使之适用于食品企业品质安全检验和进出口食品实验室检验。

发明内容

本发明的目的在于研制一种能快速且无害的检测食品中的巴西坚果过敏原试纸条，不仅能检验出食品中微量的过敏原蛋白，也可运用于食品加工过程的质量管控，如进料、生产过程及成品检测，提前预防不必要的过敏困扰。

本发明是基于一对能够检测巴西坚果蛋白的相互配对的单克隆配对抗体，这对单克隆配对抗体由美国BioFront公司提供，通过制备40nm胶体金，标记纯化后的抗体，优化各项层析条件等完成了该试纸条发明。

本发明是通过以下技术方案实现的：

食品中巴西坚果过敏原的胶体金免疫层析试纸条，包括依次组装的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫，所述的金标垫上固定一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体-胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上依次包被有与胶体金标记的抗巴西坚果蛋白单克隆抗体配位的另一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体检测线、抗原线和羊抗鼠IgG质控线。

所述的食品中巴西坚果过敏原的胶体金免疫层析试纸条还包括承载吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫的底板。

所述的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫之间相互交叠连接。

所述的一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体-胶体金标记物中单克隆抗体的浓度为2-20μg/mL。

所述的检测线中另一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体的浓度为0.5-3.0mg /mL。

所述的抗原线是由pH为5.0-7.4，浓度为0.01-0.2 mol/L的含有巴西坚果蛋白的 PB溶液作为包被液划膜得到，其中巴西坚果蛋白的浓度为10000-80000ppm。

所述的质控线中羊抗鼠IgG的浓度为0.5-3.0mg/mL。

所述的食品中巴西坚果过敏原的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

（1）将抗巴西坚果蛋白单克隆抗体中的一种作为标记抗体，与胶体金按照（0.02-0.20）：1的体积配比混匀，经纯化、浓缩后得一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体-胶体金标记物；

（2）将步骤（1）制备的胶体金标记物喷涂固定到金标垫上，在硝酸纤维素膜上包被检测线、抗原线、质控线，处理完毕后用37-65℃干燥2-24h，放入防潮柜中储存备用；

（3）试纸条的组装：

将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次连接组装或承载在底板上，即得所述的用于检测食品中巴西坚果过敏原胶体金免疫层析纸条。

本发明的检测原理为：将一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体标记到胶体金纳米颗粒上成为本发明的金标抗体，使其能够捕获巴西坚果过敏原蛋白。在硝酸纤维素膜上固定另外一种抗巴西坚果蛋白单克隆抗体作为检测线，同时固定合适的质控抗体作为质控线。当样品滴加至样品垫时，样品会利用膜上微孔的毛细管作用在层析条上做横向泳动。当样品中含有巴西坚果待检测物质时，巴西坚果待测物会与金标抗体结合形成复合物，并与检测线上的捕获蛋白结合而被截获，复合物中的胶体金聚集形成肉眼可见的红色线条（T线），故会出现TC两条线；如果金标抗体没有完全被捕获，会在抗原线结合，形成H线，故会出现THC三条线；如果待测物浓度太高，金标抗体都已经跟待测物结合，故没有多余的金标抗体被T线捕获，故会出现C线一条线。当样品中不含待检测物质时，未与待测物结合的金标抗体会被抗原线捕获，胶体金聚集形成明显的红色线条（H线），故会出现HC两条线。因此，可以根据试纸条上检测线和质控线的显色情况判断样品中是否含有待测物以及试纸条是否失效。