[发明专利]一种游离β人绒毛膜促性腺激素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种游离β人绒毛膜促性腺激素的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由α和β两个亚单位以非共价键形式结合而成。分子量为36700的糖蛋白激素。hCG由胎盘和胞体滋养层细胞产生，其α亚单位与糖蛋白激素家族的其他激素（如LH、FSH和TSH）的α亚单位氨基酸系列相同，而β亚单位不同。hCG在人体体液中以多种形式存在，如完整形式（hCG）、游离的α亚单位（hCGα）、游离的β亚单位（hCGβn）残缺的hCG（nicked hCG, hCGn），残缺游离的hCGβ亚单位（hCGβn）、和游离的hCGβ亚单位核心片段（Core fragment of hCGβ，hCGβcf）等。在临床检测中，常用到的有hCG、总hCGβ亚单位和hCGβ。hCG主要用于诊断早孕、葡萄胎和宫外孕等；而hCGβ的检测主要用于唐氏综合征的筛查和作为肿瘤标志物用于肿瘤的筛查。但其单独使用时存在检出率低，假阳性和假阴性率高的缺点，故常使用几种血清标志物联检来增大检出率。最广泛的组合为妊娠中期的血清三联检测，即AFP、free β-hCG和μE3。

目前临床上游离β人绒毛膜促性腺激素定量检测常用方法有：胶乳凝集抑制试验和血凝抑制试验、放射免疫试验（RIA），但是RIA存在放射性污染、标记半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等确定；酶联免疫吸附试验（ELISA），ELISA灵敏度低，检测范围窄，单克隆抗体胶体金试验、化学发光免疫分析（CLSA）法，其中化学发光免疫分析为当今最为敏感的微量免疫测定法，具有灵敏度高、稳定性好、无污染等优点，目前已广泛应用到基础和临床医学的各个领域，成为取代RIA和ELISA的首选技术。本发明采用吖啶酯标记，具有如下优点：①背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；②闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

本发明采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本发明建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种游离β人绒毛膜促性腺激素（free β-hCG）化学发光定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等确定，且解决了灵敏度低，检测范围窄，成本高的缺陷。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种游离β人绒毛膜促性腺激素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的磁微粒化学发光方法检测游离β人绒毛膜促性腺激素的试剂盒，采用磁微粒偶联游离β人绒毛膜促性腺激素捕获抗体，吖啶酯标记游离β人绒毛膜促性腺激素检测抗体。试剂盒还包括游离β人绒毛膜促性腺激素校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与游离β人绒毛膜促性腺激素捕获抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记游离β人绒毛膜促性腺激素捕获抗体。

作为本发明进一步的方案，所述磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。

作为本发明进一步的方案，所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记的是游离β人绒毛膜促性腺激素检测抗体。

作为本发明进一步的方案，所述的吖啶酯标记游离β人绒毛膜促性腺激素检测抗体的缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.20 mol/L的Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液。

作为本发明进一步的方案，所述的捕获抗体与检测抗体均为单克隆抗体。