[发明专利]一种测定蜂胶产品总黄酮含量的方法

说明书

一种测定蜂胶产品总黄酮含量的方法，采用了乙醇回流2次，第1次回流1.5h，第2次回流1h。药典法和甲醇索氏提取法所得的总黄酮含量较接近，且无显著性差异，同时甲醇索氏提取法具有简便、省时、经济的优点，在总黄酮含量测定时可以考虑采用甲醇索氏提取法来代替药典法。

技术领域

本发明涉及一种测定蜂胶产品总黄酮含量的方法，具体地说是以一种测定蜂胶产品总黄酮含量的方法。

背景技术

目前公知的蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物芽苞和树干处采集树胶，混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等而形成的一种具有芳香味的胶状固形物，其主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质。《中华人民共和国药典》2005版一部收载了该药材，作为抗菌消炎、调节免疫中药应用。现代药理研究表明，蜂胶总黄酮具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用。蜂胶总黄酮的含量已成为判定蜂胶产品质量的标志性物质之一，而提取方法是影响蜂胶总黄酮含量测定准确性的重要因素之一。

发明内容

仪器及试药；仪器UV2100紫外—可见分光光度计（成都科析电子商务有限公司）；8953Dietikon型电子分析天平（瑞士，精度0.1mg）；AS2060B型超声仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）等。试剂与药品流动相所用甲醇为色谱醇，其他试剂甲醇、磷酸等均为分析纯；蜂胶（毛胶，由广州市宝生园有限公司提供）；芦丁对照品（批号为0809705）由中国药品生物制品检定所提供。

方法与结果；芦丁对照品标准曲线的制备；精密称取无水芦丁对照品适量，加甲醇制成0.268mg／mL的溶液；吸取该溶液0、1、2、3、4、5mL，分别置25mL容量瓶中，加水至6mL，加50g/L亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，静置6min；加100g/L硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6min；加43g/L氢氧化钠溶液10mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，按紫外—可见分光光度法（2005版药典附录VA），在波长500nm处测定吸光度（Ｄ）。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。供试品总黄酮含量测定精确移取各样品溶液1mL，置25mL容量瓶中，加水至6mL，加50g/L亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，静置6min；提取方法的比较研究；药典法将蜂胶在-10℃冷冻数天后用粉碎机粉碎，分别精密称取1.0066g、1.0090g、0.9990g蜂胶，分别置于索氏提取器中，加100mL丙酮，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。乙醇回流法取同一批蜂胶，分别精密称取1.0028g、1.0018g、1.0074g，以体积分数95%的乙醇回流2次，每次加乙醇50mL，第1次回流15ｈ，第2次回流1ｈ，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。甲醇索氏提取法取同一批蜂胶，分别精密称取1.0008g、1.0016g、1.0024g，分别置于索氏提取器中，加100mL甲醇，加热回流至提取液无色，提取液转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。方法学考察；稳定性试验取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按项下所述方法，分别在0、1、2、3、5h不同时间点进行检测，相对标准差(sＲ)为0.8%，表明供试品溶液在5h内是稳定的。重复性试验用甲醇索氏提取法平行制备6份供试品溶液，分别测定其吸光度，sＲ为0.5%，结果表明重复性好。精密度试验取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按2.2项下所述方法，测定其吸光度，连续测定5次，其sＲ为0.3%。回收率试验精确移取0.5mL样品溶液5份，置25mL容量瓶中，分别准确加入芦丁对照品甲醇液0.5mL（0.268mg/mL），分别测定其吸光度，并计算回收率，其回收率为10008%（Ｎ=5），sＲ为0.95%。药典法和甲醇索氏提取法所得的总黄酮的含量较高，但两者无显著性差异。

结果：与药典法比较，甲醇索氏提取法简便、省时、经济，在测定总黄酮的含量时可以考虑用甲醇索氏提取法来代替药典法。