[发明专利]一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法。本发明的分离检测方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，色谱柱柱温为35~40℃，示差检测器，磷酸盐缓冲溶液与乙腈及甲醇混合溶液进行洗脱。实现了简单、快速、准确地分离检测奥贝胆酸及其合成中间体，解决了含有奥贝胆酸原料及制剂的分离检测问题，从而确保了奥贝胆酸以及含有奥贝胆酸的组合物或制剂的质量可控性。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法。

背景技术

奥贝胆酸属法尼醇X受体激动剂，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。奥贝胆酸由美国InterceptPharmaceuticals, Inc.研发成功，2014年5月，美国FDA授予Intercept制药公司的奥贝胆酸快速审批通道认定。奥贝胆酸是20年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，同时也是20年来FDA批准的第2个用于治疗原发性胆汁性肝硬化的药物；奥贝胆酸分子式为C26H44O4，化学名为6α-ethyl-3α，7α- dihydroxy-5β-cholan-24-oic acid，结构式为：

奥贝胆酸的合成工艺中经过多个步骤，这些步骤的中间体物质会影响奥贝胆酸原料纯度，这些中间体杂质残留在原料中，从而影响药物的质量和安全性。因此，控制奥贝胆酸杂质的含量，对提高奥贝胆酸原料及制剂的质量，保证广大患者的用药安全具有重大意义。

中间体1

中间体2

中间体3

中间体4

奥贝胆酸合成过程中会产生中间体1、中间体2、中间体3、中间体4杂质（结构如上式）。专利CN201710001220保护了一种奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，使用C18柱；二极管阵列检测器，柱温：20℃～30℃；以磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇溶液为流动相进行等度洗脱。但该方法中并没有能对其杂质和产品能进行有效分离的数据支持。目前奥贝胆酸尚无统一的质量标准，为了更好的控制奥贝胆酸原料药的质量，建立一套有效的分离检测方法非常必要。

发明内容

针对上述情况，本发明旨在提供一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法。通过该方法能够简单、快速、准确地分离分析奥贝胆酸及合成过程的中间体杂质，可用于奥贝胆酸的制备过程和终产品质量控制。

具体而言，本发明采用如下技术方案：

一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法，其特征在于：样品奥贝胆酸的浓度为1~5mg/ml; 流动相为磷酸盐缓冲溶液和乙腈及甲醇的混合溶液，所述磷酸盐缓冲溶液为0.005mol/L~0.02mol/L磷酸盐水溶液，所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，所述流动为磷酸盐缓冲溶液、乙腈及甲醇的体积比为磷酸盐缓冲溶液：乙腈：甲醇=（20~30）：（50~60）：（10~20）(v:v:v)；色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂的色谱柱，色谱柱柱温为35~40℃；检测器为示差检测器，检测器的温度为35~40℃。

上述分离检测方法可以按照下列方式实施：

1）取包含奥贝胆酸及中间体的样品适量，用流动相溶解，配制成浓度为1~5mg/ml的样品溶液；

2）配制流动相，流动相为磷酸盐缓冲溶液、乙腈及甲醇的体积比为磷酸盐缓冲溶液：乙腈：甲醇=（20~30）：（50~60）：（10~20）(v:v:v)；