[发明专利]C型CpG作为佐剂在HBV预防性以及治疗性疫苗中的应用及其制备方法

说明书

本发明公开了C型CpG M362作为佐剂在HBV预防性以及治疗性疫苗中的应用及其制备方法，以CpG M362为佐剂的HBV预防性疫苗区别于传统的HBV预防性疫苗的最大优点在于，不仅可以诱导机体产生高水平的体液应答，而且可以增强机体的细胞应答。同时，以CpG M362为佐剂的HBV治疗性疫苗应用于临床HBV治疗过程中，可以改善慢性HBV感染导致的肝脏的免疫抑制微环境，逆转HBV感染导致的免疫耐受，增强机体的细胞应答和体液应答，从而完全清除HBV。更重要的是，以CpG M362为佐剂的疫苗免疫接种后，可以诱导机体形成长期的免疫记忆，保护机体防止HBV的再次感染，为临床HBV的预防以及慢性HBV的治疗提供了一个新的有效策略。

技术领域

本发明属于生物技术和基因工程疫苗领域，具体涉及C型CpG M362作为佐剂在HBV预防性以及治疗性疫苗中的应用及其制备方法。

背景技术

HBV感染危害全球人类的健康。虽然HBV预防性疫苗(铝佐剂疫苗)的应用已经相当普遍，但是仍有5％-10％的人口不能产生有效的抗HBV抗体(anti-HBs)，造成全球每年大约有350万人患慢性HBV感染，其中25％-30％的患者死于由慢性HBV引起的肝硬化和肝癌。

目前，临床上常用IFN-α和核酸类似物这两种药物治疗慢性HBV，然而IFN-α和核酸类似物的治疗效果有一定的局限性。IFN-α虽然有抗病毒效果，但是临床治疗率仅有20-40％；而核酸类似物在一定程度上能抑制HBV的复制和转录，但是并不具有HBV特异性，同时可能会导致副作用及其耐药性的发生。因此，亟需开发一种新型安全有效的抗HBV疫苗用于HBV的预防和治疗。由于缺乏理想的佐剂，使得HBV疫苗的研究面临重大挑战。

免疫佐剂，作为一种非特异性的免疫增强剂，可以改变抗原自身免疫原性差的弊端，与抗原一起或预先注入机体时可有效增强免疫应答的强度或改变免疫应答的类型。佐剂的作用机制主要包括以下几个部分：改变抗原的物理性状，延缓抗原的降解和排除，从而延长抗原在体内的滞留时间，避免频繁注射从而更有效地刺激免疫系统；刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力；刺激淋巴细胞的增生和分化，可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度；改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应。因此，通过佐剂，可以增强疫苗的免疫原性，增加机体的免疫应答水平。

已有研究证明，慢性HBV的患者体内CD4⁺T、CD8⁺T细胞免疫应答功能缺失，同时高表达Treg细胞、IL-10免疫抑制分子。然而，当前商业化的HBV疫苗是铝佐剂疫苗，能诱导机体产生Th2型免疫应答，但是不能刺激机体产生抗病毒的Th1型和CTL免疫反应。因此，寻找/研发一种能有效激起机体细胞免疫应答的疫苗，打破慢性HBV患者免疫抑制的微环境，才能有效的治疗慢性HBV的感染。

CpG ODN是指含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸为核心序列的核苷酸序列。根据其生物活性以及化学组成的不同，CpG主要分为三类：A型CpG，B型CpG，C型CpG。A型CpG，比如ODN 1585、ODN2216、ODN2336，主要激活pDC，促进IFN的分泌；B型CpG，比如ODN1826、ODN 7909、ODN 2006，主要激活NF-κB信号通路，促进Th1型应答的产生；C型CpG，比如ODN 2395、ODN M362，与B型CpG ODNs相比，C型CpG活化NF-κB信号通路以及产生IL-12细胞因子能力较弱，其能否作为HBV预防性以及治疗性疫苗的佐剂目前没有相关的报道。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新型的HBV预防性以及治疗性疫苗的佐剂及其制备方法。

在本研究中我们将通过分析C型CpG M362对机体细胞免疫应答和体液免疫应答的调节作用，阐明CpG M362作为抗HBV疫苗佐剂的细胞和分子机制，评价了其作为HBV疫苗佐剂的可行性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：