[发明专利]一种绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及绞股蓝的技术领域，尤其涉及一种绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino.)，又名七叶胆、五叶参、七叶参和甘蔓茶等，是一种葫芦科绞股蓝属的多年生攀缘植物，系我国民间常用的一种中草药，是现在所知仅有的含有人参皂苷类成分的非人参属植物。据统计，目前全世界上的绞股蓝品种共有17个种2个变种，其中中国有14个种2个变种，主要分布区域为东南亚等地以及我国秦岭及长江以南地区。2002年3月5日，绞股蓝被国家卫生部列入保健品名单，成为药食两用新资源。

绞股蓝皂苷(Gypenoside，Gyp)是绞股蓝中的一种主要活性成分，其中，Gyp XLVI是福建省南靖地区绞股蓝地上部分的主要的绞股蓝皂苷之一，而另一绞股蓝皂苷，Gyp TN-1的含量则非常低。目前尚未见到有文献对Gyp TN-1的生物活性进行详细的报道。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用。

所述绞股蓝皂苷TN-1，名称为(20S)-达玛烷-24-烯-2α,3β,12β,20-四醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，为白色粉末，分子式为C₃₆H₆₂O₉，分子量为638.439结构式为：

所述绞股蓝皂苷TN-1(Gyp TN-1)，可以通过酶法转化绞股蓝总皂苷的方法，逐步分离纯化得到，其制备方法简单、成本低。当然，所述绞股蓝皂苷TN-1也可以从商业渠道获得。

所述药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、肠溶制剂、乳剂悬浮液和注射剂中的至少一种制剂形式。

本发明通过测定MTT法、集落形成试验和AO/EB荧光染色测定Gyp TN-1的体外抗肝癌活性，结果表明，绞股蓝皂苷TN-1对人肝癌细胞SMMC7721和Bel7402的生长具有显著的抑制作用，对肝癌细胞SMMC7721和Bel7402的处理48h的IC₅₀分别为36.65±12.31μg/mL、53.42±5.83μg/mL，其IC₅₀值与比较公认的抗癌药物人参皂苷IH901相近。由此可见，绞股蓝皂苷TN-1可在制备抗肝癌药物中应用，具有良好的开发应用前景。

所述绞股蓝皂苷TN-1在制备抗肝癌药物中的应用至今未见报道，由于其对于人肝癌细胞的抑制活性显著，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于肝癌的防治显然具有显著的进步。

附图说明

图1为本发明的绞股蓝皂苷TN-1对不同细胞株处理48h的抑制曲线；

图2为本发明绞股蓝皂苷TN-1的集落形成数据统计图；

图3为本发明绞股蓝皂苷TN-1的抑制肝癌细胞SMMC7721集落形成图；

图4为本发明绞股蓝皂苷TN-1的抑制不同细胞株的AO/EB荧光染色图。

具体实施方式

以下给出本发明制备方法的实施例，对本发明作进一步描述。本发明所选用的人正常肝细胞Chang Liver、肝癌细胞株SMMC7721、Bel7402均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，为公开的生物材料。

实施例1实验方法

1.1样品和试剂的配制

样品用甲醇配成浓度为50mg/mL的母液，经0.22μm膜过滤后，于4℃备用。

PBS缓冲液：137mmol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，4.3mmol/L Na₂HPO₄，1.4mmol/L KH₂PO₄(pH 7.3)，121℃，40min高压灭菌。

MTT溶液：称取250mg MTT，加50mL的PBS缓冲液，搅拌30min，0.22μm滤膜过滤除菌后，分装，4℃保存，两周内有效。

1.2细胞培养