[发明专利]一种红叶杨叶片中花色素苷的稳定性提取方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种红叶杨叶片中花色素苷的稳定性提取方法。

背景技术

‘中红杨’、‘全红杨’和‘金红杨’是2000年以来相继发现的‘2025’杨芽变彩叶品种，统称红叶杨，三者分别在2006年、2011年和2014年获得国家林木新品种保护权。中国林科院杨树育种专家黄东森教授说：“该树种填补了我国杨树育种的一项空白”，美国俄勒岗州杨树专家在山东泰安绿博会上见到该树种时大为惊讶连说：“稀世珍品，世界一绝”。红叶杨叶片的色泽是其观赏品质的核心指标，也是影响其商业价值的重要因素，花色素苷含量和比例的不同是导致‘中红杨’、‘全红杨’和‘金红杨’叶片红色层次不同的重要原因。研究表明，‘全红杨’叶片全年呈现深紫红色、紫红色、红色的直接原因是含有较多的光合色素叶绿素a和非光合花色素苷，叶片中花色素苷含量占色素比例始终高于34%；‘金红杨’叶片中含有较多的花色素苷，占色素比例在62%-81%之间，花色素苷含量及占色素比例的差异使得植株梢部至中部叶片呈现多层次的不同色彩，枝头叶片犹如花朵一样鲜艳亮丽。花色素苷是影响红叶杨品种叶色变化的主要色素，为探索红叶杨叶色机理，如何保证花色素苷的提取精确度及稳定性尤为关键，也为同类植物叶片花色素苷的提取提供参考和依据。

花色素苷是一类在自然界分布最广泛的水溶性色素，广泛存在于水果、蔬菜、花、叶、根等植物组织器官中，容易受温度、光照、金属离子、氧化还原物质、酶等的影响发生质变和降解，花色素苷提取溶剂的选择及方法取决于花色素苷本身的性质和提取的目的。用现有方法在对红叶杨叶片进行生长期花色素苷动态测定分析过程中，由于测定时间和环境的改变，常常实验误差较大，造成耗时长、损耗多，并降低了结果的可信度。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种红叶杨叶片中花色素苷的稳定性提取方法，该方法能在统一规范的条件下高效、充分抽提叶片中的花色素苷，并保持提取液中花色素苷的稳定性，使贮藏8h降解控制在0.86%以内。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种红叶杨叶片中花色素苷的稳定性提取及测定方法，其具体包括如下步骤：

1）取洗净、晾干的新鲜红叶杨叶片，去除叶柄及叶脉，剪碎为直径小于0.5mm块状后混匀，5℃下冷藏备用；

2）称取1.0g步骤1）所得的块状叶片，并加入10±1ml 浓度1%的盐酸甲醇溶液，密封以防止蒸发；

3）置于30－35℃恒温培养箱中，黑暗条件下160转/分钟摇荡浸提5－6h；

4）浸提结束后过滤，取2ml浸取液，用浓度1%的盐酸甲醇溶液稀释定容到10 ml作为待测溶液，密封，在0－4℃避光黑暗环境下保存待测。

进一步的，可将步骤4）所得待测溶液在避光环境下测定花色素苷的含量，具体为：以1%的盐酸甲醇溶液作为对照，用可见分光光度计在400－700 nm范围内扫描530nm和657nm处的吸光值OD，并代入下述公式计算获得：

花色素苷含量（g^-1·FW）= A₅₃₀ - 0.25×A₆₅₇。

本发明针对在生长期红叶杨叶片花色素苷含量动态测定过程中，由于时间、环境的改变，现有技术常常存在实验误差较大的缺陷，提供了一种规范、高效、可靠的充分抽提叶片中的花色素苷并保持提取液中花色素苷稳定性的提取测定方法。本发明方法能在统一规范的条件下高效、充分抽提叶片中的花色素苷，并保持提取液中花色素苷的稳定性，使贮藏8h降解控制在0.86%以内，该方法操作简便、规范，易于掌控、耗时少，测得的数据准确、可靠。和现有技术相比，本发明方法具有如下优势：

1）花色素苷是影响红叶杨品种叶片呈现不同的红色、紫红色或橙红色色泽的主要色素，能高效、精确地测定生长季不同时间采集的样叶中花色素苷的含量，是深入研究红叶杨叶片呈色机理的基础。本发明方法综合考虑红叶杨叶片中花色素苷本身的性质和提取目的，选择合适的提取溶剂和计算方法，选择特定范围的浸提温度、时间、光照，提取液存放温度及测定时的光照等条件，来解决用现有提取方法进行不同时期叶片花色素苷动态测定时，因时间和环境的改变造成的误差大、损耗高、效率低等问题；

2）本发明能充分抽提叶片中的花色素苷，工艺流程简单、规范、耗时少，易于掌控；

3）本发明有效提高了提取液中花色素苷的稳定性，贮藏8h使其降解控制在0.86% 以内，保证测得数据的可靠性和准确性。