[发明专利]源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人结肠癌药物的应用

说明书

本发明涉及源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人结肠癌药物的应用。该化合物具有抑制结肠癌细胞增殖作用。其结构式为：。通过发酵培养杂色曲霉(Aspergillus versicolor)IBPT‑7，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。经实验证实，该化合物对人结肠癌细胞HCT‑116具有较好的抗肿瘤活性。可作为制备人结肠癌细胞增殖抑制药物或抗肿瘤药物用于人结肠癌的研究。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人结肠癌药物的应用。

背景技术

蒽醌类化合物在天然药物中存在广泛且有重要的药理功效，如中药黄精、紫草、丹参、大黄、雷公藤等植物中都含有大量蒽醌类化合物，具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化等多种功效，特别是在癌症、心血管疾病、老年痴呆、爱滋病等重大疾病防治上应用广泛，研究成果众多，受到全球科学家和医药人士的普遍关注。其中在抗肿瘤领域，其作用机理主要表现在诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞多药抗药性作用、酶抑制剂、影响肿瘤细胞的增殖及细胞周期、抑制肿瘤细胞的代谢、对肿瘤细胞的杀伤和诱变等起作用。近年研究表明，一些海洋真菌也能够在次级代谢过程中产生结构新颖、活性好的蒽醌类化合物，具有很好的药用和产业化前景。

本发明人研究得知，杂色曲霉， (已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013715) 的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示蒽醌类化合物具有抗人结肠癌活性，目前尚未见该化合物对人结肠癌细胞的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人结肠癌药物的应用。该化合物具有抑制人结肠癌细胞增殖作用，具有抗人结肠癌活性。其结构式为：

。

该化合物的制备方法，是通过发酵培养杂色曲霉，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：

1发酵生产

培养微生物的常规方法，取杂色曲霉接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养2至3天，然后接种到SWS培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液20升；所述培养液组成：每升水含淀粉10.0 g、蛋白胨1.0 g、NaCl 20.0 g。

2 浸膏的获得

将杂色曲霉发酵培养液 (约20 L)，经由纱布过滤后分为菌丝体和发酵液两部分。发酵液部分按体积比1:2加入乙酸乙酯，经两次萃取，将所得的乙酸乙酯萃取液合并减压浓缩至近干，收取发酵液乙酸乙酯浸膏。菌丝体则用含70%-80%丙酮的水溶液超声破壁3次，除去残渣将清液合并后经减压浓缩去除丙酮，按体积比为1:2加入乙酸乙酯萃取两次，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏。将发酵液乙酸乙酯浸膏和菌丝体浸膏两部分合并后得到提取物浸膏共6.0 g。

3 化合物的分离精制

浸膏（6.0 g）通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-F。组分E(1.1 g)(二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物)以二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱剂，进行加压柱硅胶色谱层析，经过薄层色谱分析后合并得到五个亚组分E1-E5。组分E2 (0.3 g) 以三氯甲烷：甲醇=1:2为洗脱剂，进行凝胶柱层析（Sephadex LH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分E2-1~E2-4。E2的亚组分E2-2 (93 mg) 通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5 μm)：分离流速为5 mL/min，流动相为75%乙腈含0.1% TFA，得到所示化合物 (3.4 mg，t_R 9.1 min)。