[发明专利]一种蔓长春花的组织培养及繁殖方法

说明书

本发明公开了一种蔓长春花的组织培养和繁殖的方法，使得在短期内可以获得大量的优质蔓长春花种苗，满足市场的需要；所述方法分为无菌材料的获得及芽诱导培养、芽的增殖、生根和生根苗移栽；本发明以茎尖为外植体，应用组织培养的方法进行快速繁殖，克服了蔓长春花常规扦插和分株繁殖周期长、繁殖系数低、易感染和传播病毒等缺点；用该方法生产出来的组培苗具有病毒少、遗传性稳定等优点。

(一)技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种蔓长春花的组织培养和快速繁苗方法。通过这种方法，可以进行优良种苗规模生产。

(二)背景技术

蔓长春花(Vinca.major Linn.)是夹竹桃科多年生常绿蔓生草本，植株丛生，茎细长，匍匐生长，长可达1米以上，叶厚革质，椭圆形，亮绿有光泽；花单生于叶脉，淡蓝色；在地中海沿岸、印度、热带美洲以及我国的广东、江苏、浙江等地有栽培，是一种重要的园林绿化植物。蔓长春花是一种药用植物，研究表明其有效成分在治疗和改善脑血管疾病症状方面有良好的疗效。国外已进行了大量的研究,从中分离鉴定了几十种新的吲哚类生物碱,其中包括治疗脑血管疾病新药长春胺(Vincamine)。近年的药理实验证明其总生物碱还具有降压作用，对蔓长春花的研究开发正逐渐引起人们的重视。

蔓长春花虽然可以扦插繁殖，但是种植过程中易感染病毒，并且世代相传，逐年加重。病毒病易导致病毒的感染和传播,致使其品种退化严重，直接影响了其质量，使蔓长春花的经济效益受到一定影响。

生物技术的快速发展，特别是植物组织和细胞培养技术，为蔓长春花的快速繁殖育种研究提供了重要基础。因此，发明一种快速高效的蔓长春花的组织培养及繁殖方法是非常必要的。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种蔓长春花的组织培养和离体快速繁殖的方法，可提高繁殖速度和苗的整齐度，并提高蔓长春花的性状稳定性，使得在短期内可以获得大量的优质蔓长春花种苗，满足市场的需要。

本发明采用的技术方案是：

一种蔓长春花组织培养及繁殖方法，所述方法按如下步骤进行：

(1)无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的蔓长春花幼嫩的茎尖，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20min，再用无菌水冲洗3～5遍；在灭菌的滤纸上吸干水分，用解剖刀剥取0.3～0.6mm的茎尖，然后将茎尖接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加KT(即激动素)0.1～0.5mg/L、6-BA(即6-苄氨基嘌呤)0.5～2.0mg/L、NAA(即萘乙酸)0.05～1.0mg/L和谷氨酰胺50～100mg/L的MS基本培养基；

(2)芽的增殖：观察步骤(1)所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天后茎尖材料出现绿色突起，20～40天后出现丛生芽，再培养10～20天，当丛生芽长到2～4cm时，将不定芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗；所述芽增殖培养基为添加KT 0.1～0.5mg/L、6-BA 0.5～2.0mg/L、NAA 0.05～1.0mg/L、脯氨酸200～800mg/L和谷氨酰胺50～100mg/L的MS基本培养基；