[发明专利]一种结香的组织培养方法

权利要求书

1.一种结香组织培养方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：

(1)无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的结香幼嫩的腋芽，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20min，再用无菌水冲洗3～5遍；在灭菌的滤纸上吸干水分，剥取0.3～0.6mm的腋芽尖，然后将腋芽尖接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加IAA0.1～0.5mg/L、6-BA0.5～2.0mg/L、NAA 0.05～0.5mg/L和PVP 20～80mg/L的MS基本培养基；

(2)芽的增殖：观察步骤(1)所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养5～15天后，切口部位出现绿色突起，20～40天后出现丛生芽，再培养10～20天，当丛生芽长到2～4cm时，将丛生芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗；所述芽增殖培养基为添加IAA0.1～0.5mg/L、6-BA0.5～2.0mg/L、NAA 0.05～0.5mg/L、酵母浸出物200～600mg/L和PVP20～80mg/L的MS基本培养基；

(3)生根培养：将分化的丛生苗从基部切下，插入生根培养基中培养至芽生根，所述的生根培养基为改良的1/2MS培养基中加入0.05mg/L～0.2mg/L的NAA,20mg/L～50mg/L的PVP。

2.如权利要求1所述结香组织培养方法，其特征在于步骤(1)所述丛生芽诱导培养基为添加IAA0.3mg/L、6-BA1.0mg/L、NAA 0.2mg/L和PVP 50mg/L的MS基本培养基。

3.如权利要求1所述结香组织培养方法，其特征在于步骤(2)所述的芽增殖培养基为添加IAA0.3mg/L、6-BA1.0mg/L、NAA 0.2mg/L、酵母浸出物400mg/L和PVP 50mg/L的MS基本培养基。

4.如权利要求1所述结香组织培养方法，其特征在于步骤(3)所述的生根培养基为改良的1/2MS培养基中加入0.1mg/L的NAA和30mg/L的PVP。

5.如权利要求1所述结香组织培养方法，其特征在于所述生根培养的改良的1/2MS培养基是指大量元素减半，微量元素和铁盐的含量均降低为1/2的含量，不添加有机物；即终浓度组成为：NH₄NO₃ 0.83克、KNO₃0.95克、CaCl₂·2H₂O 0.22克、MgSO₄·7H₂O 0.19克、KH₂PO₄0.09克、KI 0.42毫克、H₃BO₃ 3.1毫克、MnSO₄·4H₂O 11.2毫克、ZnSO₄·7H₂O 4.3毫克、Na₂MoO₄·2H₂O 0.13毫克、CuSO₄·5H₂O 0.013毫克、CoCl₂·6H₂O 0.013毫克、Na₂EDTA 18.7毫克、FeSO₄·7H₂O 13.9毫克、蔗糖30克/升、琼脂粉9克/升，溶剂为水，pH为5.6～6.0。

6.如权利要求1所述结香组织培养方法，其特征在于所述的MS基本培养基终浓度组成为：NH₄NO₃ 1.65克/升、KNO₃ 1.9克/升、CaCl₂·2H₂O 0.44克/升、MgSO₄·7H₂O 0.37克/升、KH₂PO₄ 0.17克/升、KI 0.83毫克/升、H₃BO₃ 6.2毫克/升、MnSO₄·4H₂O 22.3毫克/升、ZnSO₄·7H₂O 8.6毫克/升、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25毫克/升、CuSO₄·5H₂O 0.025毫克/升、CoCl₂·6H₂O 0.025毫克/升、Na₂EDTA 37.25毫克/升、FeSO₄·7H₂O 27.85毫克/升、肌醇100毫克/升、甘氨酸2毫克/升、盐酸硫胺素0.1毫克/升、盐酸吡哆醇0.5毫克/升、烟酸0.5毫克/升、蔗糖20～40克/升、琼脂粉7～11克/升，溶剂为水，pH为5.6～6.0。