[发明专利]一种采用微生物转化合成对羟基苯甲醛的方法

权利要求书

1.一种采用微生物转化合成对羟基苯甲醛的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将悬液OD₆₀₀值为0.15～0.25的灵芝菌种子液，接种到含有何首乌水提物的培养液中，在24～30℃的条件下，以150～200r/min的转速，摇床培养30～40h，获得含有对羟基苯甲醛的发酵液；

2)将步骤1)获得的发酵液采用萃取剂萃取2～4次后，再浓缩结晶，得对羟基苯甲醛粗品；采用有机溶剂溶解所述粗品，加入凝胶色谱柱中进行提纯，即得对羟基苯甲醛。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灵芝菌种子液按培养液体积百分比为5％～6.8％的接种量接种至培养液中；

所述灵芝菌种子液与所述何首乌水提物的体积比为1:1.5～2.5。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述灵芝菌种子液采用如下方式制得：将灵芝菌在固体培养基上活化后，接种至液体培养基中，培养至悬液OD₆₀₀值为0.15～0.25，备用。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述何首乌水提物采用如下方式制得：取6～6.5g生首乌，加4～5倍的水煎煮2～3次，每次煎煮25～35min，过滤取滤液，加水定容至22～27mL，备用。

5.根据权利要求3所述的方法，所述何首乌水提物采用如下方式制得：取6～6.5g生首乌，加4～5倍的水煎煮2～3次，每次煎煮25～35min，过滤取滤液，加水定容至22～27mL，备用。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述培养液中包括5.5～6.5g/L的马铃薯浸粉和16～24g/L的葡萄糖。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)具体为：将悬液OD₆₀₀值为0.2的灵芝菌种子液，按培养液体积百分比为5％～6.8％的接种量接种至含有何首乌水提物的培养液中，在26～30℃的条件下，以160～200r/min的转速，摇床培养36～40h，获得含有对羟基苯甲醛的发酵液；

所述灵芝菌种子液与所述何首乌水提物的体积比为1:1.8～2.2。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述萃取剂为乙酸乙酯或正丁醇。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇或氯仿。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，每毫升有机溶剂溶解0.4～0.5g对羟基苯甲醛粗品。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述提纯具体为：将预先甲醇溶液浸泡后的凝胶粉加入凝胶柱中；再将溶解后的对羟基苯甲醛粗品溶液经过0.15～0.28μm的微孔滤膜过滤后，加入凝胶柱中；控制每6秒一滴的流速，收集TLC检测有斑点的部位，减压浓缩干燥，即得对羟基苯甲酸。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将悬液OD₆₀₀值为0.2的灵芝菌种子液，按培养液体积百分比为5％～6.8％的接种量接种至含有何首乌水提物的培养液中，在26～30℃的条件下，以160～200r/min的转速，摇床培养36～40h，获得含有对羟基苯甲醛的发酵液；

所述灵芝菌种子液与所述何首乌水提物的体积比为1:1.8～2.2；

2)将步骤1)获得的发酵液采用乙酸乙酯萃取2～4次后，合并乙酸乙酯层，再浓缩结晶，采用甲醇溶解结晶，得对羟基苯甲醛粗品；

3)将预先甲醇溶液浸泡后的凝胶粉加入凝胶柱中；再将甲醇溶解后的对羟基苯甲醛粗品溶液经过0.20～0.24μm的微孔滤膜过滤后，加入凝胶柱中；控制每6秒一滴的流速，收集TLC检测有斑点的部位，减压浓缩干燥，即得对羟基苯甲醛。