[发明专利]一种高纯度尿促性素的提取制备方法

说明书

本发明提供一种高纯度尿促性素的制备方法，该制备方法包括以下步骤：(1)人绝经期促性腺激素粗制品经过阴离子交换层析纯化，得到高中间体I；(2)中间体I经过阳离子交换层析纯化，得到中间体II；(3)中间体II经过染料亲和层析纯化，得到高纯度尿促性素。本发明依次采用阴离子交换层析、阳离子交换层析、染料亲和层析工艺，提取纯化制得高纯度HMG。经过阴离子交换层析与阳离子交换层析，HMG纯化倍数可达60倍以上。利用FSH及LH能与染料亲和吸附的性质，进一步去除杂质蛋白。经过3步层析工艺，使HMG纯化倍数达到500倍以上，从而获得高纯度尿促性素，其中FSH与LH比例约为1:1。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高纯度尿促性素（High Purified HumanMenopausal Gonadotropin，HP-HMG）的提取制备方法。

背景技术

20世纪60年代人尿促性素（HMG）产品问世以来，就开始广泛用于人类不孕症的治疗。此后，20年间它成为全世界范围内不孕症治疗的主流。HMG中卵泡刺激素(FSH)和黄体生成激素(LH) 二者的比例为1:1。含有FSH 的第一代产品是尿促性素(HMG)，如Serono 公司的Pergonal，它是FSH与LH 比例约为1:1 的混合物。但是它的比活和纯度都很低，比活一般在40-300IU/mg 蛋白，纯度只有2-3％的有效成分，其余约97％都是杂蛋白。HMG在我国已应用多年，可独立地作为促排卵治疗的用药， 一般用在排卵功能障碍用克罗米酚作为一线治疗失败的不孕症妇女；也应用于低促性腺激素性性腺功能不全的男性和女性；还广泛应用于行体外受精( invitro fertilization， IVF) 的控制性促排卵( controlled ova rianhyperstimulation, COH) 的妇女中。但同时它也有明显的不足之处，如尿蛋白杂质多、尿源的污染、批间的不稳定性、过敏反应、不能皮下注射等。这就需要在辅助生育治疗中使用更高纯度和质量的HMG产品。

高纯度的HMG（HP-HMG）是从天然提取的促性腺激素制剂，纯度达到了重组单组分制剂的水平。HP-HMG相比于普通纯度的HMG，应当具备纯度高、杂质少的优点，基于这些优点，HP-HMG不会造成人体的过敏反应，且可以使用皮下注射，提高患者的顺应性。

专利US7022822B1中公布了一种高纯度HMG的制备方法，工艺为HMG粗品先用阳离子交换层析纯化，再经阴离子交换层析，最后使用疏水层析技术。由于FSH与LH在疏水性质上差异较大，要同时纯化两者需要使用较强的洗脱条件，比如添加乙醇，才能将两者同时洗脱，此洗脱条件会将疏水性介于FSH与LH中间的杂质蛋白洗脱，因此最终产品比活性只有4000IU/mg蛋白质左右。要制备更高纯度的HMG，需要开发使用更有效的分离技术，将FSH与LH同时纯化，使其达到最终的1:1比例，同时，尽量去除杂质蛋白。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度尿促性素的提取制备方法，本方法操作简便、生产成本低，对原料的要求低，工业适应性强，获得的HP-HMG纯度更高，卵泡刺激素（FollicleStimulating Hormone，FSH）与黄体生成素（Luteotropic Hormone，LH）的比例接近1:1。 高纯度尿促性素比活性以FSH计，大于8000IU/mg 蛋白质，FSH:LH约为1:1。

本发明采用的技术方案如下：一种高纯度尿促性素的提取制备方法，制备方法包括以下步骤：

(1) 人绝经期促性腺激素（Human Menopausal Gonadotropin，HMG）粗制品经阴离子交换层析纯化，得到中间体I；

(2) 中间体I经阳离子交换层析纯化，得到中间体II；

(3) 中间体II经染料亲和层析纯化，得到高纯度尿促性素溶液。