[发明专利]微小脲原体的LAMP检测引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种微小脲原体的LAMP检测引物组，包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF和环引物LB，其核酸序列分别如下所示：

外引物F3：5’-GCTGGTCCTTTATTCACCTTA-3’；

外引物B3：5’-GGCAATGTGATAATATGGCCCC-3’；

内引物FIP：5’-GGTGCCATCATCAGTGTTATCATTAACGACGAATTAGGAAGGAA-3’；

内引物BIP：5’-TGGCTGAAATGGGTTATTTTGTAAACTTCATTGCGGTGTT-3’；

环引物LF：5’-AATTGCGATATCAGTTTGATC-3’；

环引物LB：5’-AATACTGATTGAAGAGTTCACA-3’；

其中，外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF和环引物LB在反应体系中的摩尔比为1:1:8:8:4:4。

2.一种微小脲原体的LAMP检测试剂盒，包括引物、反应液、Bst DNA聚合酶、指示剂、密封液，其特征在于：引物为权利要求1所述的LAMP检测引物组。

3.根据权利要求2所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：反应液包括dNTP、反应缓冲液、MgSO₄和甜菜碱。

4.根据权利要求2所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：指示剂为荧光染料或显色剂。

5.根据权利要求4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：荧光染料为SYBR green，显色剂为羟基萘酚蓝。

6.根据权利要求2～5任一项所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：密封液为石蜡油。

7.根据权利要求2～5任一项所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：Bst DNA聚合酶的终浓度为6～10U/μL。

8.根据权利要求2～5任一项所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于：外引物、内引物和环引物的初始浓度均为10μM。

9.一种微小脲原体LAMP检测试剂盒检测微小脲原体的方法，包括如下步骤：

1)提取待检样品DNA；

2)使用权利要求2～8任一项所述的LAMP检测试剂盒扩增样品DNA，反应条件为63℃等温反应60min进行扩增，然后90℃等温反应2min终止反应；

3)根据指示剂的指示情况，判断结果；

该方法不用于疾病的诊断。