[发明专利]PIK3CA基因突变检测体系及其试剂盒

权利要求书

1.一种PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：包括用于检测PIK3CA基因第9外显子E542K和E545K位点的上下游引物A，用于检测PIK3CA基因第20外显子H1047R和H1047L位点的上下游引物B；包括荧光染料SYBRGreen和肽核酸；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示；

所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQID No.4所示；

所述肽核酸包括核苷酸序列与PIK3CA野生型基因第9外显子E542K和E545K位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的肽核酸A，以及核苷酸序列与PIK3CA野生型基因第20外显子H1047R和H1047L位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的肽核酸B。

2.根据权利要求1所述的PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：所述上下游引物A、B进行了LNA修饰。

3.根据权利要求1所述的PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：所述上下游引物A、B在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L。

4.根据权利要求3所述的PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：所述上下游引物A在反应体系中的最终浓度为0.19μM/L，所述上下游引物B在反应体系中的最终浓度为0.2μM/L。

5.根据权利要求1所述的PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：所述肽核酸A、B在反应体系中的最终浓度均为1～1.5μM/L。

6.根据权利要求5所述的PIK3CA基因突变检测体系，其特征在于：所述肽核酸A、B在反应体系中的最终浓度均为1.25μM/L。

7.一种采用如权利要求1所述的检测体系的PIK3CA基因突变检测产品。

8.一种PIK3CA基因突变检测试剂盒，其特征在于：包括PCR检测液A、PCR检测液B和SYBRGreen混合液；

所述PCR检测液A包括用于检测PIK3CA基因第9外显子E542K和E545K位点的上下游引物A和肽核酸A，所述PCR检测液B包括用于检测PIK3CA基因第20外显子H1047R和H1047L位点的上下游引物B和肽核酸B；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示，

所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQID No.4所示；所述肽核酸包括核苷酸序列与PIK3CA野生型基因第9外显子E542K和E545K位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的肽核酸A，以及与PIK3CA野生型基因第20外显子H1047R和H1047L位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的肽核酸B。

9.根据权利要求8所述的PIK3CA基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述上下游引物A、B进行了LNA修饰；所述上下游引物A、B在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L；所述肽核酸A、B在反应体系中的最终浓度均为1～1.5μM/L。

10.根据权利要求8所述的PIK3CA基因突变检测试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照P1、阳性对照P2和阴性对照；

所述阳性对照液P1是浓度为100ng/μL的包含PIK3CA基因第9外显子E542K和E545K位点和第20外显子H1047R和H1047L位点的野生型质粒溶液；

所述阳性对照液P2是浓度为100ng/μL的包含PIK3CA基因第9外显子E542K和E545K位点和第20外显子H1047R和H1047L位点的突变型质粒溶液；

所述阴性对照液是不含PIK3CA基因的基因组DNA溶液。