[发明专利]赤点石斑鱼与鞍带石斑鱼远缘杂交育种方法

权利要求书

1.一种赤点石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼远缘杂交育种方法，它包括如下步骤：

1)控温前亲本选择：

a.赤点石斑鱼雌性亲本：选择3～5龄、体重0.5～1kg、体型正常、活力强、无携带神经坏死病毒的赤点石斑鱼；b.鞍带石斑鱼雄性亲本：选择6龄以上、体型正常、活力强、无携带神经坏死病毒的鞍带石斑鱼；

2)亲本培育：

赤点石斑鱼与鞍带石斑鱼分别在不同亲鱼培育池中养殖；

a.赤点石斑鱼：赤点石斑鱼雌鱼在控温前为工厂化流水养殖，培育温度与自然海水温度相同，15-31℃，随着冬季的结束，每年的2月份开始，将赤点石斑鱼亲鱼移至循环水中养殖，通过人工控温的方法将赤点石斑雌性亲本培育水温控制在19-20℃，控温时间为每年的2月份至9月份；

b.鞍带石斑鱼：鞍带石斑鱼冬季在循环水中养殖，水温22～23℃，每年的1月份开始鞍带石斑雄性亲本培育水温每3天升高1℃，逐步由23℃升高至30℃，之后保持在29～30℃，控温时间为1月份至7月份，当自然海水温度达到29℃时，使用工厂化流水养殖方式培育鞍带石斑鱼雄鱼；

亲本培育期间保证海水的盐度27～33，pH 7.8～8.2，溶解氧≥6mg/L，氨氮＜0.1mg/L；

3)亲本营养强化：

从控温开始，对赤点石斑鱼亲鱼和鞍带石斑鱼亲鱼进行营养强化，将营养强化剂黏附在冰鲜的蓝圆鲹或鲐鱼上，营养强化剂包括增加裂壶藻和维生素E，增加投饵量至鱼体重的2～3％，定时投喂饵料，每2天投喂一次；

4)亲本人工催产：

赤点石斑鱼：亲鱼培育至4月中旬开始挑选个体健康，性腺发育至Ⅳ期的雌鱼进行催产，注射催产激素，所用催产激素种类和剂量分别为：绒毛膜促性腺激素HCG，400～700IU/kg鱼体质量和促黄体激素释放激素类似物LRH-A3，3～7μg/kg鱼体质量；第一批赤点石斑鱼催产开始，每隔1周对赤点石斑鱼雌鱼进行挑选，选择腹部明显膨胀的雌鱼进行催产；

鞍带石斑鱼：亲鱼培育至4月中旬开始挑选挤压腹部后可排出精液的鞍带石斑鱼雄鱼进行催产，所用催产激素种类和剂量分别为：绒毛膜促性腺激素HCG，200IU/kg鱼体质量和促黄体激素释放激素类似物LRH-A3，2～3μg/kg鱼体质量；

5)人工授精和孵化：

赤点石斑鱼雌鱼催产激素最佳效应时间为32-38h，挑选腹部生殖孔微红的赤点石斑鱼，将成熟的卵子挤到容器中；再轻压鞍带石斑鱼雄鱼腹部，挤出精子，在显微镜下检查精子质量，确保用于受精的精子活力大于90％；将精子和卵子迅速混合，加入新鲜的海水搅拌均匀；静置，收集上浮卵至孵化桶中孵化；孵化温度为24～28℃，盐度27～33，pH 7.8～8.2，溶解氧≥6mg/L，氨氮＜0.1mg/L，受精卵孵化至原肠期时，收集受精卵移至育苗池中。

2.如权利要求1所述的一种赤点石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼远缘杂交育种方法，其特征在于，步骤1)病毒检测是通过尾动脉取血，利于荧光定量PCR对神经坏死病毒进行检测。

3.如权利要求1所述的一种赤点石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼远缘杂交育种方法，其特征在于，步骤5)中，精卵比为1ml:1kg。

4.如权利要求1所述的一种赤点石斑鱼雌鱼与鞍带石斑鱼雄鱼远缘杂交育种方法，其特征在于在步骤5)中，受精卵孵化方式为微充气条件下流水孵化。