[发明专利]组织工程皮肤及其制备方法

权利要求书

1.一种组织工程皮肤，由种子细胞和支架组成，所述种子细胞种植于所述支架表面，其特征在于，所述种子细胞为真皮干细胞和表皮干细胞的混合物。

2.根据权利要求1所述的组织工程皮肤，其特征在于，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞按照细胞数量比0.5-5:1的比例混合，

任选地，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞来源于自体或异体皮肤组织，

任选地，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞均为P0-P5代细胞，

任选地，所述支架为选自海绵状胶原-黏多糖支架、聚乳酸/聚乙醇酸支架、聚氧乙烯支架和脱细胞真皮基质的任意一种。

3.根据权利要求1所述的组织工程皮肤，其特征在于，所述种子细胞的种植密度为100,000-20,000,000细胞/平方厘米，

任选地，通过将种子细胞的细胞悬液滴加在支架上并进行孵育的方式实现所述种植。

4.一种制备组织工程皮肤的方法，其特征在于，以真皮干细胞和表皮干细胞的混合物作为种子细胞，并将所述种子细胞种植于支架上，以便得到所述组织工程皮肤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞按照细胞数量比0.5-5:1的比例混合，

任选地，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞来源于自体或异体皮肤组织，

任选地，所述真皮干细胞和所述表皮干细胞均为P0-P5代细胞，

任选地，所述支架为选自海绵状胶原-黏多糖支架、聚乳酸/聚乙醇酸支架、聚氧乙烯支架和脱细胞真皮基质的任意一种。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子细胞的种植密度为100,000-20,000,000细胞/平方厘米。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，通过将种子细胞的细胞悬液滴加在支架上并进行孵育的方式实现所述种植。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞悬液是利用真皮干细胞培养基或磷酸缓冲溶液悬浮所述种子细胞获得的，且所述细胞悬液的浓度为2.0×10⁴-2.0×10⁹细胞/毫升。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在37℃、5％CO₂的条件下，进行所述孵育4小时-14天。

10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)利用黏多糖的醋酸溶液和胶原的醋酸溶液制备海绵状胶原-黏多糖支架；

(2)从皮肤组织分离获得真皮干细胞，并进行悬浮培养；

(3)从皮肤组织分离获得表皮干细胞，并进行贴壁培养；

(4)将经过悬浮培养的真皮干细胞和经过贴壁培养的表皮干细胞，按照0.5-5:1的比例混合，得到以细胞悬液形式存在的种子细胞，然后按照100,000-20,000,000细胞/平方厘米的种植密度，将所述细胞悬液滴加在所述海绵状胶原-黏多糖支架上，并在37℃、5％CO₂的条件下培养4小时-14天，以便将种子细胞种植于支架上，获得所述组织工程皮肤。