[发明专利]牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。本发明所述疫苗由BVDV I a、BVDV I b、BVDV II a、BVDV II b四种基因亚型组成，牛病毒性腹泻灭活疫苗是利用细胞转瓶、全悬浮及微载体培养的传代细胞系进行病毒增殖，并对制苗工艺等进行了优化。疫苗安全和效力检验结果显示：使用本发明的牛病毒性腹泻灭活疫苗免疫牛后没有任何局部和全身不良反应，所有的牛都产生了免疫保护，说明本发明的疫苗安全可靠，可预防不同BVDV基因亚型引起的疾病，本发明所述的疫苗还包括以上四个基因亚型抗原制备的各型单价灭活疫苗、二价灭活疫苗和四价灭活疫苗。

技术领域

本发明涉及一种牛病毒性腹泻病毒的灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由属于黄病毒科、瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)引起的一种病毒性传染病，主要侵害牛、羊、鹿、耗牛、猪等动物，各年龄牛均易感。临床主要表现为腹泻，急、慢性黏膜病，持续性感染与免疫耐受，免疫抑制，怀孕母畜流产或产生畸形胎儿等。1946年Olafson等在美国首次发现该病，以发热、腹泻和咳嗽为特征，称为牛病毒性腹泻。Ramsey和Chiverst于1953年首先发现了黏膜病(Mucosal disease，MD)，1971年美国兽医协会将其统一命名为牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)。该病在世界范围内广泛分布，是造成全球养牛业经济损失的主要病原。另外，BVDV还是牛源生物制品(血清、冻精等)的潜在污染源，给相关领域造成巨大的经济损失。上世纪80年代初，李佑民等首次在流产胎儿的脾脏中分离并鉴定出BVDV，证明该病在我国的存在。血清学调查表明，BVD在我国呈上升趋势。

根据BVDV基因组5’-UTR的序列比较，可将BVDV分为I型、II型两个基因型，其中属于基因I型的BVDV I a与BVDV I b在世界范围内流行，而基因II型中主要流行的是BVDV IIa与BVDV II b。我国主要流行BVDV I a与BVDV I b，近年也出现了BVDV II a与BVDV II b的相关报道。

发明内容

本发明的目在于采用牛肾细胞(MDBK)繁殖牛病毒性腹泻病毒，将四种不同基因亚型的BVDV作为抗原分别制备成相应的单价苗、二价苗与四价疫苗，用于预防不同基因亚型BVDV引起的疾病。

本发明的技术方案

1.一种牛病毒性腹泻灭活疫苗，其特征在于该灭活疫苗由BVDV I a、BVDV I b、BVDV II a、BVDV II b四种基因亚型组成，含有BVDV I a、BVDV I b、BVDV II a、BVDV II b四种灭活抗原。

2.本发明所述的牛病毒性腹泻灭活疫苗，其特征在于所述灭活抗原是用牛病毒性腹泻病毒L株、牛病毒性腹泻病毒L2株、牛病毒性腹泻病毒T株和牛病毒性腹泻病毒D株制备的，其中L株病毒已于2017年03月15日、其他三株(L2株、T株和D株)于2017年10月26日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号分别为CGMCC No.13787、CGMCC No.14719、CGMCC No.14718和CGMCC No.14720。

3.本发明所述的一种牛病毒性腹泻灭活疫苗的制备方法，其特征在于该方法步骤包括：

(1)细胞培养：将牛肾细胞系(MDBK)采用贴壁培养或/和悬浮培养或/和微载体培养的方式进行传代和培养；

(2)毒种繁殖：将牛病毒性腹泻病毒L株、牛病毒性腹泻病毒L2株、牛病毒性腹泻病毒T株和牛病毒性腹泻病毒D株作为生产种毒分别接种在牛肾细胞上，并通过细胞繁殖获得制备疫苗用病毒抗原；

(3)抗原灭活：将制备的病毒液使用灭活剂进行灭活；