[发明专利]一种基于磁珠技术的微流控芯片检测方法

权利要求书

1.一种基于磁珠技术的微流控芯片检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，荧光标记：采用时间分辨荧光分析法对已透析的抗体原料进行标记，并收集荧光标记物；

步骤2，磁珠标记：将磁珠与抗体溶液进行反应，反应结束后，对磁珠进行封闭清洗，并使用磁珠保存液复溶后，形成免疫磁珠；其中，与抗体溶液进行反应的磁珠选取表面含有甲苯磺酰基的磁性微球；

步骤3，封闭液的涂覆与烘干：向微流控芯片的定量-反应腔添加封闭液进行封闭，然后，将封闭液烘干处理；封闭液包含有2%的BSA、0.5%的Tween-20、10%的海藻糖以及0.2%的甘露醇；其中，采用封闭液对定量-反应腔进行封闭的具体方法为：下层芯片上定量-反应池的每个隔腔中均添加5µL的封闭液，中层芯片上反应池盖板的每个盖板分体中均添加6µL的封闭液；封闭液添加后，在45℃烘箱下，进行烘干处理5min；定量-反应腔采用透明的光学器件，能有效的检测光信号，且荧光分子稳定存在，不受时间和激发次数的影响；

步骤4，免疫磁珠的固定：步骤3中的封闭液烘干后，将步骤2磁珠标记后形成的免疫磁珠添加至中层芯片上的反应池盖板中，然后，烘干，使免疫磁珠与中层芯片固定；

步骤5，荧光标记物的固定：步骤3中的封闭液烘干后，将步骤1收集的荧光标记物添加至下层芯片上定量-反应池的中间隔腔中，然后，烘干，使荧光标记物与下层芯片固定；封闭液的使用，则有效隔断微控芯片以及液体试剂，使得免疫磁珠和荧光标记物能够固定在微控芯片内部不随意流动；同时在加入样本以及稀释液时能迅速溶解并保持原有的生物活性；封闭液同时还起到防止荧光标记物在微控芯片内的吸附的作用，荧光标记物由于不直接与微控芯片接触，因此降低了非特异性的吸附；

步骤6，微流控芯片组装：将上层芯片、固定有免疫磁珠的中层芯片以及固定有荧光标记物的下层芯片，依次进行组装合并；

步骤7，加样准备：移液器加样，吸取样本加入步骤6组装完成的微流控芯片的加样孔内；随后，将加样完成的微流控芯片进入检测仪器内，微流控芯片与芯片接触装置结合；芯片接触装置中的气路装置缓慢充气，推动样本往前移动，气体由透气口流出，样本流入定量-反应腔内，并分别与烘干状态的免疫磁珠和荧光标记物相接触；当样本继续向前移动并接触到定量-反应腔末端的导电橡胶时，电容变化，触动流道阀门开关，使流道阀门关闭；同时，关闭气路开关，停止加压；

步骤8，免疫反应：开启超声发生器，对步骤7加样完成的微流控芯片的定量-反应腔进行超声处理，使免疫磁珠与荧光标记物复溶，并与样本进行混合，进行免疫反应；免疫反应时间控制在5-10分钟；

步骤9，清洗：免疫反应结束后，强磁体对磁珠免疫复合物进行磁固定，气体推动样本向前移动，吹干加样孔和流道样本，清洗液路装置启动，进入定量-反应腔内，调控强磁体，开启超声装置，超声混匀1-3分钟，进行清洗；清洗结束后，对定量-反应腔施加磁力，再次固定磁珠免疫复合物，将多余的样本以及荧光标记物清洗至废液回收区；接着，加样口处的气体推动清洗液继续进行移动，吹干定量-反应腔和流道液体，并撤除强磁力；

步骤10，显色：增强液液路装置启动，进入流道内，进入定量-反应腔内，控制定量增强液的加入，超声混匀3-8分钟，进行显色反应；

步骤11，数据读取：读取微流控芯片上定量-反应池中的荧光强度，计算并给出结果报告。

2.根据权利要求1所述的基于磁珠技术的微流控芯片检测方法，其特征在于：步骤6中，采用超声键合的方式，将上层芯片、固定有免疫磁珠的中层芯片以及固定有荧光标记物的下层芯片依次组装合并。