[发明专利]一种奶牛乳房炎三联多肽表位疫苗的合成方法

说明书

本发明公开了一种奶牛乳房炎三联多肽表位疫苗的合成方法，包括如下步骤：分别选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌抗原性较好的蛋白各2种，通过生物信息学方法预测每种蛋白抗原性较好的B/T细胞表位；采用Protean软件重组拼接获得的B/T细胞抗原表位，设计抗原性较好的乳房炎三联重组表位多肽；进行多肽表达菌株的培养和诱导；采用SDS‑PAGE电泳切胶方法获得高纯度的表位多肽。本发明设计获得了抗原性较好的奶牛乳房炎三联表位多肽，确定多肽菌株的最佳表达条件与培养条件，表位多肽抗血清具有很好的免疫原性，多肽蛋白对奶牛乳房炎常见致病菌均具有一定的免疫保护作用。为奶牛乳房炎三联表位疫苗的开发奠定基础。

技术领域

本发明涉及疫苗合成领域，具体涉及一种奶牛乳房炎三联多肽表位疫苗的合成方法。

背景技术

奶牛乳房炎又称奶牛乳腺炎，是奶牛的乳腺组织受到病原微生物或者理化刺激等因素而产生的一系列炎症反应的疾病，为目前影响奶牛业发展最为严重的一种常见病和多发病。奶牛乳房炎不仅导致乳腺组织发生变化，乳汁也会发生变化，其颜色改变甚至有大量白细胞和凝块，严重时会发生乳腺脓肿、萎缩、坏死，甚至丧失分泌乳汁的能力，流行性和危害性广泛，使牛奶的产量和质量降低，危害食品卫生安全，严重地制约我国奶制品业的健康发展。

引起奶牛乳房炎的常见致病菌有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等，其中金黄色葡萄球菌为优势菌群。有效控制奶牛乳房炎对提高奶牛生产性能，减少经济损失，促进奶业持续健康发展具有极其重要的意义。目前防治奶牛乳房炎的方法有抗生素、中药和疫苗防治，但均存在不足。抗生素治疗易导致药物滥用，引起细菌耐药性增加，药物残留和环境污染；中药防治起效慢，养殖户一般不愿使用；疫苗治疗研究较多，但商品化疫苗不常见，有必要开发一种新型疫苗。

表位疫苗是一种新型疫苗，代表疫苗未来的研制方向，在癌症、艾滋病、肝炎等重大疾病上均有研究，但在奶牛乳房炎防治上尚处于空白。

发明内容

为解决上述问题，本发明借助于表位疫苗的最新研究成果，为奶牛乳房炎防止提供一种新的思路，实现防治上的创新，填补国内外奶牛乳房炎表位疫苗研制的空白。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种奶牛乳房炎三联多肽表位疫苗的合成方法，包括如下步骤：

S1、分别选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌抗原性较好的蛋白各2种，通过生物信息学方法预测每种蛋白抗原性较好的B/T细胞表位；

S2、采用Protean软件重组拼接获得的B/T细胞抗原表位，设计抗原性较好的乳房炎三联重组表位多肽；

S3、进行多肽表达菌株的培养和诱导；

S4、采用SDS-PAGE电泳切胶方法获得高纯度的表位多肽。

优选地，所述步骤S1具体包括如下步骤：

S11、分别选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌抗原性较好的蛋白各2种，综合BepiPred和ABCpred两种方案的重叠序列区段，最终获得金黄色葡萄球菌ClfA蛋白可能的B细胞表位区段为：114-129，326-330；Efb蛋白B细胞表位为：85-98，124-139；大肠埃希菌OmpA蛋白B细胞表位区段为：44-50，126-135；OmpT蛋白B细胞表位为96-105，116-131；链球菌GapC蛋白B细胞表位区段为208-252，673-708；Fba蛋白B细胞表位为：169-178，239-246。

S12、综合多肽共有的区段，获得金黄色葡萄球菌ClfA与Efb蛋白Th表位区段分别为：201-209，149-157；大肠埃希杆菌OmpA与OmpT蛋白Th表位区段分别为：284-292、259-267；链球菌GapC与Fba蛋白Th表位区段分别为：278-286，234-242；