[发明专利]一种人纤维蛋白原的制备方法

说明书

本发明提供了一种人纤维蛋白原的制备方法，包括如下步骤：(1)将人血浆低温乙醇沉淀组分I溶解于提取液中，得到组分I溶液；(2)对步骤(1)得到的组分I溶液进行S/D灭活；(3)将赖氨酸亲和层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(2)得到的溶液进行柱层析，收集穿透峰；(4)将阳离子交换层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(3)得到的穿透峰进行柱层析，层析结束后用淋洗液淋洗层析柱，最后用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，得到人纤维蛋白原。本发明提供的方法操作简单，能够有效去除纤溶酶原，得到的人纤维蛋白原制品具有较高的纯度和稳定性。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种人纤维蛋白原的制备方法。

背景技术

人纤维蛋白原是由肝脏合成的一种凝血因子，在血浆中含量约为2-4g/L，最重要的生理功能是参与凝血过程。人纤维蛋白原是一种纤维状蛋白，具有对称的二聚体结构，两个单体氨基酸形成中心E结构域，羧基端形成两个膨大的末端D结构域。在凝血酶的作用下，人纤维蛋白原E、D结构域活化，暴露出结合位点。每个E结构域与2个相邻人纤维蛋白原的D结构结合，最终形成网状结构，实现凝血功能。

目前人纤维蛋白原的生产主要采用低温乙醇法(CN 102286095A)，以血浆为原料，共经过3-4次乙醇沉淀得到人纤维蛋白原。该方法主要的缺陷为制品外观较差，纯度低，质量稳定性差。

也有报道采用层析法制备人纤维蛋白原，如CN 101703763A采用DEAE-650M凝胶层析柱对S/D灭活的血浆提取液进行分离。但是该层析方法是流穿的方法，即杂蛋白被吸附，人纤维蛋白原流出，因此仍然需要一步或多步沉淀以除去S/D试剂。而且，层析介质有一定的特异性，不能保证所有杂蛋白都被吸附去除，导致产品的纯度较低。

另外，人血浆中含有纤溶酶原，上述低温乙醇沉淀法和层析法均难以将其有效除去。纤溶酶原能与纤维蛋白特异性结合，在临床使用中可以将其与溶栓药物结合，使药物特异性地作用于血栓位点，减少药物副作用，其本身具有良好的应用价值。但是纤溶酶原在纤维蛋白降解过程中也起到重要作用，其残留在纤维蛋白原制品中，则会导致产品稳定性下降。

如果在制备人纤维蛋白原的同时，能够将纤溶酶原分离出来，则不仅可以提高人纤维蛋白原制品的稳定性，还可获得纤溶酶原制品，提高血浆原料的利用率。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种人纤维蛋白原的制备方法，该方法操作简单，能够有效去除纤溶酶原，得到高纯度、稳定性好的人纤维蛋白原制品。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种人纤维蛋白原的制备方法，包括如下步骤：

(1)将人血浆低温乙醇沉淀组分I溶解于提取液中，得到组分I溶液；

(2)对步骤(1)得到的组分I溶液进行S/D灭活；

(3)将赖氨酸亲和层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(2)得到的溶液进行柱层析，收集穿透峰；

(4)将阳离子交换层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(3)得到的穿透峰进行柱层析，层析结束后用淋洗液淋洗层析柱，最后用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，得到人纤维蛋白原溶液。

赖氨酸亲和层析介质对纤溶酶原具有较强的吸附力，对人纤维蛋白原则不吸附，阳离子交换层析介质主要吸附人纤维蛋白原。本发明采用赖氨酸亲和层析可以有效去除纤溶酶原，采用阳离子交换层析在提高人纤维蛋白原纯度的同时去除S/D试剂，简化工艺流程。

第二方面，本发明提供一种从人血浆低温乙醇沉淀组分I中去除纤溶酶原的方法，包括如下步骤：

(1)将人血浆低温乙醇沉淀组分I溶解于提取液中，得到组分I溶液；

(2)对步骤(1)得到的组分I溶液进行S/D灭活；