[发明专利]2型猪圆环病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，具体领域为一株2型猪圆环病毒及其应用。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2，PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属，是断奶仔猪多系统衰竭综合症(Postweaning multi-sytemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原。PCV2还与猪皮炎与肾病综合征(PDNS)，猪的流产和不孕性疾病，猪增生性坏死性肺炎(PNP)和猪先天性脑震颤(CT)等的发生密切相关。PCV2主要在单核和巨噬细胞中复制，树突状细胞也可感染，引起机体的免疫系统损伤，造成免疫抑制，PCV2经常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)或猪细小病毒(PPV)，猪支原体肺炎等并发感染或继发细菌感染，使患病猪病情加重。自1991年在加拿大首次发现PMWS以来，疾病在世界各地相继爆发，现在PCV2感染在世界范围内广泛存在，给养猪业造成了巨大的经济损失，PCV2及其所致的相关疾病己经引起了各国的高度重视，预防和控制PCV2及其相关疾病已经迫在眉睫。

在PCV2相关疾病的防控中疫苗免疫是核心，已经证实使用疫苗可以减轻疾病的严重程度，抑制病毒在体内的繁殖和扩散，减少排毒，现有疫苗主要包括全病毒灭活疫苗和CAP蛋白亚单位疫苗。对于PCV2灭活疫苗来说影响免疫效果关键是抗原含量即病毒滴度，但是PCV2公认的在体外培养困难，毒价不高，必须在具有旺盛增殖能力并处于有丝分裂过程中的细胞上复制，并且PCV2的复制依赖于细胞周期s期表达的各种细胞蛋白及酶。Tischer等(1987)发现用D-氨基葡萄糖处理接种PCV的PK-15细胞时，可促进病毒DNA进入细胞核，提高病毒复制能力。Fenaux等(2004年12月病毒学杂志，美国微生物学会)报道称PCV2在细胞上的增殖滴度非常低，经过120代连续传代之后滴度增加了1个lg单位，也只达到10^3.75TCID50/mL。目前国内的主要疫苗株的病毒分离和病毒滴度统计于下：洪伟彬(2005，南京农业大学博硕论文)在2mmol/l-氨基葡萄糖条件下将PCV2-SH(2002)株于PK-15细胞上连续传代至50代，结果发现F20和F50两个代次的病毒的滴度均为10^6.25TCID50/ml；刘长明(2005年，中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会)PCV2/LG株在经氨基葡萄糖处理的PK15细胞上培养传代，传30代后，毒价可稳定在10^5.45-10^5.6之间；严伟东(2008，国家星火培训计划及国家农业行业科技，第十届全国规模猪场主要疫病监控与净化专题研讨会论文集)PCV2-WH株在氨基葡萄糖处理PK-15细胞传代培养，病毒滴度随代次显著增加，第20代时达到10^7.0TCID50/mL；王贵华(2012，北京大北农集团动物医学研究中心-新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会)在3mmol/L的D--氨基葡萄糖条件下5个分离株(疫苗株为DBN-SX07)经过连续传代，毒价均有明显的提升，当传至15代时，均提高了约3个lg单位，可达到10^5.25TC1D50/ml。综上可见经刺激剂处理细胞和连续传代可以提高毒价，且不同分离株株对PK15的适应性存在差异，经过大量分离株的筛选有可能分离到对PK15细胞适应性好的毒株。

发明内容

本发明的目的在于提供一株2型猪圆环病毒及其应用，以解决现有技术中PCV2在PK15的增殖效率低，为满足疫苗生产的需求，需要通过复杂的处理(比如克隆筛选敏感的细胞、加D-氨基葡糖或其他刺激剂处理细胞、浓缩等方法)来提高毒价的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

2型猪圆环病毒PCV2JS1507，保藏号CGMCC No.14336，保藏日期：2017年08月17日。

本发明所述的2型猪圆环病毒PCV2JS1507，其全基因组序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。

2型猪圆环病毒PCV2JS1507在制备2型猪圆环病毒疫苗或多联疫苗中的应用。

一种2型猪圆环病毒减毒活疫苗，包括本发明所述的2型猪圆环病毒PCV2JS1507。

2015年江苏省某猪场保育猪发生疑似PMWS的症状，对送检的淋巴结，进行了病毒的分离、PCR、PCV2特异性单抗进行间接免疫荧光鉴定、通过在PK-15细胞连续传代20代，得到一株高度适应PK-15细胞的PCV2毒株。