[发明专利]葡萄糖氧化酶CnGOD19及其改良酶、基因和应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体涉及葡萄糖氧化酶CnGOD19及其改良酶、基因和应用。改良酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示，改良后的葡萄糖氧化酶CnGOD19A具有较好的酶学性质，可以广泛应用于食品、化工、医药以及其它生物技术产业。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及葡萄糖氧化酶CnGOD19及其改良酶、基因和应用。

背景技术

葡萄糖氧化酶(GOD，E.C.1.1.3.4)是由分子量大小为60-90kDa的两个相同亚基组成的同型二聚体，为一种黄素依赖型需氧脱氢酶，属于GMC(glucose/methanol/choline)氧化还原酶家族，这一家族的酶广泛应用于食品、化工、医药以及其它生物技术产业，尤为重要的是在医学诊断方面的应用。

目前我国生产的葡萄糖氧化酶工业酶制剂来源少、纯度低且酶学性质极不稳定，长期以来依赖进口，因此寻找进口酶制剂的替代产品具有重要意义。

发明内容

本发明从枝孢菌Cladosporium neopsychrotolerns SL-19菌株中挖掘的新来源葡萄糖氧化酶基因，不仅拓展了葡萄糖氧化酶基因的挖掘范围，而且通过对该基因改良设计得到了一种酶学性质较好的葡萄糖氧化酶CnGOD19A，将进一步推进葡萄糖氧化酶的挖掘和改良工作。

本发明的目的是提供一种新来源且未见报道的葡萄糖氧化酶。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶的编码基因。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶的改良酶。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶改良酶的基因。

本发明的再一目的提供包含上述葡萄糖氧化酶改良酶的编码基因的重组载体。

本发明的再一目的是提供包含上述葡萄糖氧化酶改良酶的编码基因的重组菌株。

本发明的再一目的是提供一种生产新来源葡萄糖氧化酶改良酶的方法。

本发明的再一目的是提供上述葡萄糖氧化酶改良酶的。

本发明中所提供的葡萄糖氧化酶Cngod19基因来源于Cladosporiumneopsychrotolerns SL-19菌株，该基因的cDNA序列如下SEQ ID NO.1所示。

经比对显示该基因为新基因，该基因所对应的肽链具有葡萄糖氧化酶活性。

根据上述核苷酸序列可以得到所对应的葡萄糖氧化酶CnGOD19氨基酸序列如下SEQ ID NO.2所示。

该序列所对应蛋白质的理论等电点为4.68，理论分子量约为61.58KDa，第1-16个氨基酸为信号肽。为了排除该理论信号肽对蛋白后期表达分泌的影响，在构建重组表达载体时，可以去除信号肽所对应的核苷酸序列，而后表达所对应的氨基酸序列如下SEQ IDNO.3所示。

通过实验验证上述葡萄糖氧化酶Cngod19基因所表达多肽具有葡萄糖氧化酶活性，但是活性较低，设计多种方案对Cngod19基因进行改造，最终优化获得有效的改造方案，得到Cngod19A基因，其核苷酸序列如下SEQ ID NO.4所示。

根据上述核苷酸序列可以得到所对应的葡萄糖氧化酶改良酶CnGOD19A，其氨基酸序列如下SEQ ID NO.5所示。