[发明专利]中度贫血男性生精障碍致病基因NFATC1及其检测方法

说明书

本发明提供了中度贫血男性生精障碍致病基因NFATC1的突变形式，其序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了中度贫血男性生精障碍致病基因NFATC1的检测方法，该检测方法是基于NFATC1致病基因片段的扩增和其Sanger测序，主要涉及SEQ ID NO:2‑SEQ ID NO:3序列所示扩增引物对。本发明提供的NFATC1致病基因形式尚未被报道，其可以为中度贫血男性生精障碍致病机理的解析、致病基因检测以及针对性预防和治疗等提供依据和奠定基础；所构建的NFATC1致病基因检测方法具有准确可靠和简便快捷的特点。

技术领域

本发明涉及基因及其检测方法，特别涉及中度贫血男性生精障碍致病基因NFATC1及其检测方法。

背景技术

在生育年龄的男性中约有5%存在不育问题，其中的40％属于精子质量异常，主要表现为少精症、无精症和精子活力差等生精障碍。男性生育能力依赖于有功能的精子，精子在睾丸内产生和发育的过程是由众多相关基因控制，这些基因发生异常就会影响精子的形成从而造成男性不育。目前认为生精相关基因的突变、插入/缺失和遗传多态性是男性生精障碍的重要遗传病因，然而其中大部分生精相关基因尚未得到解析。因此探究男性生精障碍致病基因特征十分有必要，这是揭示男性不育遗传机制、致病基因检测以及针对性预防和治疗的基础。近年来，随着二代测序技术的发展和测序成本的降低，可以实现在基因组层面上对疾病致病基因的研究。然而由于疾病往往存在复杂性，因此必须将二代测序结果和基本体征以及临床信息相结合从特定的疾病亚群入手更好地解析其致病基因特征。

本发明申请人从25例生精障碍患者样本的全外显子组测序结果中发现，有3例患者都出现了NFATC1基因的c.95750GC突变，而同时此3例患者均为中度贫血体征。经进一步验证，本发明申请人首次揭示了基因NFATC1为中度贫血男性生精障碍相关基因并提供了其致病突变形式，在此基础上构建了基于PCR扩增和Sanger测序的突变检测方法。

发明内容

本发明提供了中度贫血男性生精障碍亚群对应的致病基因，并在此基础上构建了致病基因的检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的目的之一在于提供中度贫血男性生精障碍致病基因NFATC1，突变所在片段序列如SEQ ID NO:1所示，对应的突变为c.95750GC，发生在Exon9中；所述突变基因形式经验证，为中度贫血男性生精障碍致病基因。值得注意的是，SEQ ID NO:1仅展现出突变所在的片段序列，基因的其余序列详见GeneBank上登录号NG_029226.1的野生型参考基因序列，c.95750GC表示的是NFATC1基因的95750位点的G突变成C。

其中，所述中度贫血男性生精障碍致病基因的揭示，可以但不限于用于制备中度贫血男性生精障碍诊断芯片和试剂盒、构建中度贫血男性生精障碍检测方法以及制备中度贫血男性生精障碍治疗药物。

本发明的另一目的在于提供中度贫血男性生精障碍致病基因突变检测方法，主要是利用SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:3所示引物对扩增NFATC1致病基因片段，并对扩增产物进行Sanger测序以判断是否发生c.95750GC突变。

其中，SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:3所示引物对扩增的是c.95750GC突变所在的基因片段，扩增片段对应于GeneBank上登录号NG_029226.1的野生型参考基因序列的95496-95859，扩增片段长度为364bp。致病基因NFATC1片段的扩增引物对SEQ ID NO:2-SEQ IDNO:3可应用于制备中度贫血男性生精障碍诊断芯片和试剂盒以及构建男性生精障碍检测方法中。

本发明提供了NFATC1基因引起的中度贫血男性生精障碍的c.95750GC突变基因形式，以及基于PCR扩增和Sanger测序的致病基因检测方法，这些可以为其致病机理的解析、致病基因检测以及针对性预防和治疗等提供依据和奠定基础。