[发明专利]一种苦参再生体系的建立技术

权利要求书

1.一种苦参再生体系的建立技术，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体消毒：采集苦参健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒16s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

（2）分化培养：将经步骤（1）处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导,接种后先在25℃条件下全暗培养32天，然后每天光照18小时，光照强度为2500lx，培养温度为24℃的条件下培养24天后统计愈伤组织诱导率、38天后统计分化率；

（3）增殖培养：将步骤（2）诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成0.6cm左右的小块并接种到继代培养培养基进行增殖培养,接种后先在29℃条件下全暗培养8天，然后每天光照18小时，光照强度为5100lx，培养温度为29℃的条件下培养52天后以不定芽长度≥1.2cm为有效芽统计增殖倍数；

（4）生根培养：选取步骤（3）生长状态一致的组培苗，剪成4cm长的茎段并接种至生根培养中诱导生根,接种后每天光照15小时，光照强度为5100lx，培养温度为29℃的条件下培养42天后观察苗的生长状况并统计生根率；

（5）炼苗移栽：选取经生根培养后,根系发达且植株生长健壮的组培苗进行炼苗移栽,首先洗去组培苗基部附着的琼脂,之后将其移栽到事先浇透的河沙基质中,之后向小苗进行喷雾,搭建简易塑料拱棚,保证棚内空气相对湿度达100%，覆盖塑料薄膜,以保证炼苗期间棚内的湿度,之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度,沙培26天后，将其移栽至由草炭土:腐殖土:珍珠岩=2:2:1组成的混合基质中，栽植后绕浇透水,日常养护时注意保证盆土湿润忌积水,并时常向叶片喷水，移栽21天后统计移栽成活率。

2.根据权利要求1所述的一种苦参再生体系的建立技术，其特征在于步骤（2）所述的分化培养基为：MS+2.1mg/L TDZ+1.2mg/L IBA+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。

3.根据权利要求1所述的一种苦参再生体系的建立技术，其特征在于步骤（3）所述的继代培养基为：MS+1.2mg/L TDZ+0.6mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.9。

4.根据权利要求1所述的一种苦参再生体系的建立技术，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3.2mg/L IBA+2.2mg/L ABT₁+32g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.9。