[发明专利]叠鞘石斛中香豆素类物质的制备方法

权利要求书

1.一种叠鞘石斛中香豆素类物质的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）以叠鞘石斛鲜条为原料，切片后干燥，用质量浓度60-80%的乙醇溶液热回流提取2-3次，每次1.5-2h，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，浓缩得乙醇粗提流浸膏；

（2）在步骤（1）乙醇粗提流浸膏中加入2-3倍流浸膏体积的石油醚-氯仿溶液，萃取3-4次，水相静置备用，收集合并石油醚氯仿萃取液，浓缩回收有机溶剂，得萃取浓缩膏；

（3）向步骤（2）萃取浓缩膏中加入其3倍体积的氨水溶液、三乙胺溶液、二乙胺溶液、三乙醇胺溶液中的一种，在超声条件下提取2-3次，每次15-20min，过滤弃滤渣得提取液，向提取液中加入稀盐酸溶液调节pH值到7，静置冷藏24小时，底部有棕黄色沉淀产生，其中氨水溶液、三乙胺溶液、二乙胺溶液或三乙醇胺溶液的质量浓度为5-10%；

（4）将步骤（3）的棕黄色沉淀过滤出来，加入沉淀物体积5-6倍的乙醚超声溶解，室温放置得淡黄色结晶，过滤，得叠鞘石斛脂溶性香豆素，结晶自然挥干乙醚后得香豆素精油；

（5）用旋转蒸发减压回收步骤（2）水相中残余的石油醚氯仿溶剂后所得水相层，上非极性大孔树脂柱，水洗到流出液无色，用氨水-乙醇溶液洗脱香豆素类成分，收集洗脱液，当所得洗脱液经异羟肟酸铁反应不显红色后停止洗脱，向洗脱液中加入稀盐酸调节pH值到7，浓缩得稠膏；

（6）在步骤（5）稠膏中加入其体积5-6倍的无水乙醇室温超声处理2-3次，每次20min，合并处理后溶液，过滤，滤液浓缩回收乙醇得香豆素甙类浸膏；

（7）步骤（6）中香豆素甙类浸膏用丙酮溶解结晶，过滤得结晶，真空干燥结晶体得黄白色粉末，即为香豆素甙类提取物；

所述氨水-乙醇溶液是将氨水添加到质量浓度40-50%的乙醇溶液中制得，其中氨水在混合液中的质量浓度为5-10%。

2.根据权利要求1所述的叠鞘石斛中香豆素类物质的制备方法，其特征在于：石油醚-氯仿溶液为石油醚和氯仿按体积比1:1-1:2的比例混合制得。

3.根据权利要求1所述的叠鞘石斛中香豆素类物质的制备方法，其特征在于：稀盐酸质量浓度为2%-5%。

4.根据权利要求1所述的叠鞘石斛中香豆素类物质的制备方法，其特征在于：非极性大孔树脂型号为HB1600。