[发明专利]一种高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记及其应用在审
申请号: | 201711122692.7 | 申请日: | 2017-11-14 |
公开(公告)号: | CN107619880A | 公开(公告)日: | 2018-01-23 |
发明(设计)人: | 童治军;肖炳光;陈学军;方敦煌;李永平 | 申请(专利权)人: | 云南省烟草农业科学研究院 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
代理公司: | 昆明知道专利事务所(特殊普通合伙企业)53116 | 代理人: | 谢乔良,张玉 |
地址: | 650031*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 高效 鉴别 母本 起源 烟草 单倍体 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记,其特征在于所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记的编号为TM56686,其扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
2.根据权利要求1所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记,其特征在于所述的分子标记所对应的引物序列为:
TM56686-F:5’- TGCTTAATGCGTAGGCTGTG -3’,
TM56686-R: 5’- GGTCCATATATTGCCAAATGC -3’。
3.一种权利要求1或2所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记的应用,其特征在于所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记在鉴别获得母本起源的烟草单倍体中的应用。
4.根据权利要求3所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记的应用,其特征在于是以标记TM56686的引物扩增待检测母本起源的烟草植株基因组DNA,检测其PCR扩增产物,如果PCR扩增产物中仅含有254bp如SEQ ID No.1所示核酸序列即为母本起源的烟草单倍体;如果PCR扩增产物中仅含有286bp如SEQ ID No.2所示核酸序列即为二倍体;如果PCR扩增产物中同时含有254bp和286bp如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核酸序列即为混倍体。
5.根据权利要求4所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记的应用,其特征在于PCR扩增的反应体系为50uL,其中包含5.0 μL 的1× buffer (10 mM Tris-Cl, PH=8.4, 50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2),500 μM 的 dNTPs(Takara Biotechnology Co. Ltd., Dalian, China),1.5 μM 的上下游引物(Takara),2.5 U 的 rTaq 聚合酶(Takara),30-100ng模板DNA,最后用ddH2O补齐50uL。
6.根据权利要求4所述的高效鉴别母本起源的烟草单倍体的分子标记的应用,其特征在于PCR扩增的反应条件为:95℃预变性5分钟,30个循环(95℃变性30秒,60℃复性30s,72℃延伸30s),72℃延伸5分钟,4℃保存。
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