[发明专利]一株布氏乳杆菌HEW-A666及其应用

说明书

本发明提供了一株新分离的布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）HEW‑A666，该菌具有显著的益生性以及抗逆性；其应用于全株玉米青贮，可明显降低玉米青贮的pH值，乙酸和乳酸的含量明显增多，乳酸菌含量也明显提高，而霉菌和酵母菌含量则低于检测限，从而提高玉米青贮的发酵品质；而且提高了全株玉米青贮的感官品质和有氧稳定性，且营养成分高，有利于动物对青贮玉米的饲用。

技术领域

本发明涉及青贮用益生菌，特别涉及一株布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）HEW-A666及其应用。

背景技术

青贮饲料是在密闭环境下通过厌氧发酵使作物秸秆中的糖类转化为乳酸，产生酸性环境，抑制和杀死各种有害微生物的繁殖而达到保存新鲜饲料及青绿牧草营养成分的一种技术；这种饲料基本保留了青绿饲料原有的青绿、多汁、营养丰富等特点，而且青贮饲料来源丰富，在制作时可将秸秆的色泽及叶片保留。青贮饲料柔软多汁、气味酸甜、芳香且适口性好，能促进动物消化腺的分泌，提高饲料的消化率，其制作方法简便且不受气候和季节的限制，故被广泛应用。但青贮饲料的制作过程中涉及到饲料中部分营养物质如植物细胞壁的降解、微生物的发酵等过程，会直接影响青贮饲料品质的好坏，故在进行青贮饲料的加工制作过程中常使用添加剂对青贮过程进行调控。青贮添加剂可以用来提高青贮的营养物质，可以有效的促进青贮的发酵，改善青贮品质(增加需氧稳定性)，并提高饲料的适口性。

在青贮过程中增加乳酸菌，可以有效降低青贮中pH，增加乳酸的产量，以取得早期乳酸发酵的优势，有效抑制有害微生物的繁殖。乳酸菌依发酵糖生产乳酸的能力可将乳酸菌分为两类，一类是同质型发酵乳酸菌(homo-fermentative lactic acid bacteria)，如植物乳杆菌、戊糖片球菌等；另一类是异质型发酵乳酸菌(hetero-fermentative lacticacid bacteria)，如布氏乳杆菌等。研究结果表明，乳酸菌能减少酵母菌和霉菌的产生，有效抑制肠球菌和肺炎克雷伯菌等有害细菌及其他微生物的生长(张涛等，2009；Filya等，2006)。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一株抗逆性和益生性强的布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）HEW-A666及其应用。

为了实现本发明的目的，本发明提供的布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）HEW-A666是从自然发酵秸秆中分离的乳酸杆菌菌株，通过菌落形态观察、生理生化特征、分子生物学鉴定等确定其为布氏乳杆菌。该菌株具有耐酸性，产酸性和抗逆性强，且对青贮腐败菌有抑制作用等。

本发明提供的布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）HEW-A666，已于2017年08月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101），保藏编号为CGMCCNO.14508，分类命名为布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）。

本发明还提供了上述布氏乳杆菌HEW-A666的培养方法，包括以下步骤：

1）将菌株HEW-A666在平板上划线培养，30℃，48h，从平板上挑取单菌落于100mL种子培养基中，30℃，180r/min震荡培养24h，获得HEW-A666一级种子液，活性达4.0×10⁹CFU/mL；

2）将HEW-A666一级种子液按照0.5%-5%（V/V）的接种量接种于50L发酵罐中，进行二级发酵，发酵4-12h获得HEW-A666二级种子液；