[发明专利]一种金毛狗脊孢子的组培方法

权利要求书

1.一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用4-6分钟后，再用无菌水冲洗3-5次，晾干后收集于无菌袋中；

(2)孢子预处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于2-6℃保藏340-380天，破开孢子囊收集孢子，并用70％-75％的酒精对孢子消毒20-40秒后离心，无菌水冲洗2-3次，再用2-5％的次氯酸钠对孢子消毒4-10分钟离心，再用无菌水冲洗2-3次；收集消毒的孢子加入无菌生理盐水制成孢子悬液；

(3)接种与培养：将步骤(2)获得的孢子悬液取0.05-0.1ml接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，涂布使孢子悬液均匀分布于培养基表面，于光照培养箱中进行萌发培养，温度22-28℃、每天2000-2500Lx光照10-12小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有孢子体培养基的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度22-28℃、每天2000-2500Lx光照10-12小时；

(4)炼苗移栽：当配子体长出第3片叶后，冲洗干净配子体根部培养基转移至含有营养土的营养穴中，每天喷雾1-2次保持湿度，在室温和自然光照条件下培养15-30天后进行田间移栽。

2.根据权利要求1所述的一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，所述孢子萌发培养基由1/2改良MS培养基、1-3％蔗糖、0.6-0.8％琼脂组成。

3.根据权利要求1所述的一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，所述孢子体培养基由改良MS2号培养基、1-3％蔗糖、0.6-0.8％琼脂组成，所述改良MS2号培养基由改良MS培养基、土豆提取液和蜂花醇组成。

4.根据权利要求2或3所述的一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，所述改良MS培养基中改良的成分为：MgSO4·7H2O调整为180-200mg/L；CaCl2·2H2O调整为200-220mg/L；KNO3调整为600-700mg/L，(NH)4NO3调整为500-600mg/L；KH2PO4调整为170-200mg/L；增加(NH)2HPO4 350-400mg/L。

5.根据权利要求4所述的一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，所述孢子萌发培养基还包括无菌6-BA0.02-0.1mg/L和无菌IAA0.02-0.1mg/L，所述孢子体培养基还包括无菌GA₃0.02-0.1mg/L和无菌6-BA0.02-0.1mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，所述萌发培养为60-90天，所述配子转化培养为45-90天。