[发明专利]一种耐制粒乳酸菌制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种耐制粒乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)菌种活化

将甘油管中保存的粪肠球菌、屎肠球菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳杆菌、布氏乳杆菌、干酪乳杆菌、动物双歧杆菌解冻后，在无菌条件下，在MRS平板上进行划线分离，于35℃培养48h，从MRS平板上挑取单菌落进行斜面划线，于35℃培养16h，保藏备用；

(2)一级培养

分别取生长旺盛的斜面，然后用灭菌后的接种环刮取1环菌于100mL的一级培养基中，于35℃培养10-20h，获得各乳酸菌的一级培养液；

(3)二级培养

将各乳酸菌的一级培养液分别接种于50L发酵罐的二级培养基中，接种量为1-5%，装液量为25-35L、发酵温度为25-40℃、搅拌转速80-120r/min，培养8-15h得到二级种子液；

(4)三级培养

将粪肠球菌、屎肠球菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳杆菌、布氏乳杆菌、干酪乳杆菌及动物双歧杆菌的二级种子液均按照1%（v/v）的接种量接种于20吨发酵罐的三级培养基中，总接种量为4-12%，装液量为50-70L、发酵温度为25-40℃、搅拌转速80-120r/min，培养48-72h得到三级发酵液；

(5)乳酸菌湿菌粉制备

将三级发酵液通过8000r/min离心30min获得乳酸菌活性菌泥，之后将该乳酸菌活性菌泥与保护剂按照（0.5-2）:（1.5-3）的比例混合30min，获得高浓度乳酸菌菌悬液，于混合机中，同时加入可溶性淀粉20-50份，混合5min，得乳酸菌湿菌粉；

(6)乳酸菌湿颗粒制备

将该乳酸菌湿菌粉加入制粒机中，调节粒度20-40目，得到20-40目微囊母粒，然后将其加入QZL-1300型球形抛丸机中制粒，旋转速度为500r/min，制粒过程中雾化，按照该乳酸菌菌粉和包被剂1:5的比例，以65mL/min的速度喷涂包被剂，最终获得乳酸菌湿颗粒；

(7)乳酸菌制剂制备

将乳酸菌湿颗粒于流化床中干燥15min，进风温度65℃，出风温度35℃；启动侧喷包衣装置，将包衣溶液以30mL/min的速度喷向乳酸菌湿颗粒，形成包衣，制得乳酸菌制剂；

所述保护剂以重量份数计的具体组成为：海藻糖2-10份，山梨醇1-5份，牛血清白蛋白0.5-2.5份，明胶1-4份，脱脂乳5-15份，谷氨酸钠2-8份，吐温80 0.8-2份，甘油1-2.5份，维生素D 0.1-1.0份，低聚麦芽糖1-8份，低聚木糖1-8份，葡聚糖1-8份，聚乙二醇0.5-5份，维生素C 0.1-1.0份，乙二胺四乙酸0.1-1.0份，水20-40份；将各物质依次加入水中，边搅拌边加入，搅拌60min使其充分溶解，即得保护剂；

所述包被剂以重量份数计的具体组成：羟丙基甲基纤维素1-10份，聚乙二醇2-5份，明胶4-8份，聚乙烯吡咯烷酮1-3份，肠溶型丙烯酸树脂1-5份，醋酸纤维素2-6份，β-环糊精2-10份，水5-30份；将上述各组分依次加入水中，搅拌15min，充分混匀即可；

所述包衣溶液以重量份数计的具体组成：玉米淀粉2-10份，甘露醇1-5份，羧甲基纤维素钠2-10份，脱脂奶粉2-10份，低聚果糖1-15份，水8-40份；将上述各组分依次加入水中，搅拌20min，充分混匀即可。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述一级、二级培养基按重量百分比计的具体组成为：葡萄糖1-2.5%，柠檬酸三钠0.5-1.5%，玉米粉0.5-2%，胰蛋白胨1-2%，无水乙酸钠0.2-1%，磷酸氢二钾0.01-0.05%，磷酸二氢钾0.01-0.05%，硫酸镁0.01-0.1%，硫酸锰0.01-0.05%，硫酸亚铁0.02-0.08%，碳酸钙0.02-0.2%，吐温80 0.8-1.2%，余量为水，pH6.2-7.2。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述一级、二级培养基按重量百分比计的具体组成为：葡萄糖1.25%，柠檬酸三钠0.8%，玉米粉1.5%，胰蛋白胨1.2%，无水乙酸钠0.4%，磷酸氢二钾0.03%，磷酸二氢钾0.01%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.02%，硫酸亚铁0.02%，碳酸钙0.45%，吐温80 1.1%，余量为水，pH6.5。