[发明专利]通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量的方法

说明书

本发明公开了一种通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量方法，在林可链霉菌中，通过基因工程途径缺失TetR家族转录调节基因SLCG_2919，获得林可霉素高产工程菌株，用所获得的菌株发酵生产林可霉素可以大幅度提高产量，为工业生产提高林可霉素产量提供新的技术支持。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量的方法。

背景技术

链霉菌能产生丰富的次级代谢产物，且这些次级代谢产物及其衍生物用途广泛，诸如抗生素、抗癌药、免疫抑制剂等。目前医疗上使用的抗生素和抗癌药，超过一半以上都是由链霉菌产生的。全基因组测序研究发现链霉菌含有多个生物合成基因簇，且这些基因簇或是沉默的，或是生物合成能力较弱，需要通过筛选才能获得工业生产高产菌株。过去工业生产菌株主要通过物理或化学诱变方法获得。传统的诱变技术不但耗时，且随机性较大，无法对育种提供理论性指导。本发明目的就是通过基因工程途径定向改变基因来获得林可霉素高产菌株，用于林可霉素或中间产物生产。

林可链霉菌NRRL2936是1962年从土壤中分离出的第一株林可霉素产生菌。其次级代谢产物林可霉素A是重要的林可酰胺类抗生素，目前林可霉素系列化学衍生物(盐酸林可霉素、克林霉素等)被广泛用来治疗感染性疾病。随着林可霉素及其衍生物在医疗和商业上需求的日益增长，吸引了许多科学家来研究如何提高其产量。同其它放线菌类似，林可霉素的生物合成基因也成簇的集中在一个DNA片段上。1995年，Peschke等在林可链霉菌78-11中成功克隆了林可霉素的生物合成基因簇，其基因簇大小为35kb，包含27个开放阅读框和至少12个转录单元。到目前为止，关于林可霉素生物合成基因簇内基因，lmrC、lmbH、lmbB2、lmbU和lmbQ等已有研究报道。

2005年，Ramos等以序列相似性、结构和功能为标准将原核生物转录调控子分成LysR、AraC/XylS、TetR、LuxR、LacI、ArsR、IcIR、MerR、AsnC、MarR、NtrC(EBP)、OmpR、DeoR、Cold shock、GntR和Crp共16个家族。其中TetR家族调控基因在DNA结合结构域上有高度的保守性，广泛参与调控多药抗性、抗生素合成、渗透性应激反应等生物活动。近年来报道了多种参与抗生素产量和链霉菌形态分化的TetR家族转录调控子，比如SACE_3986，SACE_3446，SACE_7301，SCO1712，SAV151，SAV576，JadY，AtrA等，暗示着TetR家族调控基因在链霉菌次级代谢及抗生素生物合成中的重要性。林可链霉菌全基因组中有92个TetR家族基因，然而却没有关于林可链霉菌次级代谢TetR家族调控基因研究，且对于其调节林可霉素产量的精确机制阐明的还未清楚。

发明内容

本发明目的就是通过缺失林可链霉菌中负调控基因SLCG_2919，通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量方法，其特征在于：通过基因工程途径使林可链霉菌中SLCG_2919基因失活，获得林可链霉菌林可霉素高产工程菌株，用所述的菌株发酵生产林可霉素，即可。

所述的一种通过改造林可链霉菌SLCG_2919基因提高林可霉素产量的方法，其特征在于所述的SLCG_2919基因产物可以负向调控林可霉素生物合成。

SLCG_2919基因在工业菌株中的应用，在工业高产菌株中缺失TetR家族转录基因SLCG_2919基因，获得高产突变株，可用于林可霉素生产。

本发明的优点是：