[发明专利]中药型肉鸡免疫抑制剂及其免疫抑制模型的建立方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种中药型肉鸡免疫抑制剂及其免疫抑制模型的建立方法和应用。

背景技术

家禽的免疫抑制是由某些病毒、细菌、真菌、寄生虫感染、霉菌毒素或化学药物作用等多种原因引起的，其造成家禽免疫组织和免疫器官受损，导致机体的免疫机能下降，引起疫苗免疫失败和增加其他疾病混合感染或继发感染的几率，使死淘率大幅上升、生产性能显著下降，给养殖业造成巨大损失。因此，如何提高家禽特异或非特异免疫功能，研制高效的兽用免疫增强剂，已成为兽药研究的当务之急。但由于兽医临床上缺乏一种科学和客观评价药物免疫增强作用的实验模型，在申报兽药新证书时，均不能提供可靠的、令人信服的试验数据。因此，在兽医临床上，迄今为止尚没有一种具有免疫增强作用的药物或制剂被批准为正式药品。肉鸡免疫抑制模型的建立可以为肉鸡免疫增强药物或添加剂的研发提供理想、可靠的实验动物模型及完善的评价体系，对新兽药或功能性添加剂研发和评价具有重要意义，应用前景广阔。

目前，临床上运用的免疫抑制剂主要有糖皮质激素类，如强的松；微生物代谢产物，如环孢菌素等；抗代谢物，如6-巯基嘌呤等；多克隆和单克隆抗淋巴细胞抗体，如抗淋巴细胞球蛋白等；烷化剂类，如环磷酰胺等。这些药物疗效在某种程度上虽已被证实，但毒副作用大（如骨髓抑制、肝肾损伤、继发性感染等）。与化药免疫抑制剂相比，中药免疫抑制剂有以下特点:①成分多样化、药理作用广泛且复合，除免疫抑制作用外，还有抗炎、抗过敏及免疫双向调节等作用；②毒性小、副作用少，而且通常为可逆的，减量或停药即消失。另外，我们利用生物发酵技术对中药进行处理，从而达到提高中药药效、降低毒副作用目的。因此，应用发酵中药作为免疫抑制剂，诱导免疫抑制模型具有非常重要意义。据检索，在小鼠上利用激素、环磷酰胺、环孢菌素等西药建立免疫抑制模型的研究较多，但由于不同动物在生理机能等方面存在很大差异，用小鼠免疫抑制模型作为其他畜禽新兽药研发、免疫抑制机理研究和病毒感染模型建立等方面的评价，其可靠性存在极大疑问。目前尚未见到利用发酵中药诱导建立肉鸡免疫抑制模型的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种中药型肉鸡免疫抑制剂及其免疫抑制模型的建立方法和应用，为新兽药或功能性添加剂研发、免疫抑制机理研究、病毒感染模型建立等提供理想、可靠的实验动物模型及完善的评价体系。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

设计一种中药型肉鸡免疫抑制剂，由下述体积份数的药物制成：发酵雷公藤提取液8～12份、发酵苏木提取液4～8份、发酵青藤提取液2～4份、发酵甘草提取液2～4份，混匀加入一定量的双抗。

优选的，所述双抗为青霉素和/或链霉素的混合液，所述青霉素和/或链霉素在中药型肉鸡免疫抑制剂中终效价为每毫升100～500 IU。

各中药发酵液的制备步骤如下：

（1）取雷公藤、苏木、青藤、甘草中药分别于50～60℃下烘干2～3h，粉碎，100%过60～120目筛；

（2）将步骤（1）所得各中药调整物料含水量为45～55%，pH值为5.8～6.5，取枯草芽孢杆菌：产朊假丝酵母：嗜酸乳杆菌=1∶1∶1，混匀后，按4%接种量接入各药物中，搅拌均匀后装入不透气的塑料袋中，压实，封口，置于30～35 ℃的环境中培养70～75h，阴干，即得对应的发酵中药；

（3）将上步所得发酵中药加6～10倍70％的乙醇回流提取，提取2～4次，每次1.5～2.5h时，过滤，合并滤液，将滤液减压浓缩至一定浓度，即得对应的发酵中药提取液。

一种中药型肉鸡免疫抑制模型的建立方法，包括以下步骤：

（1）从肉鸡5日龄开始，取所述中药型肉鸡免疫抑制剂，按20mL/kg体重的剂量，每天1次灌服，连用10天；

（2）7日龄时点眼滴鼻免疫新城疫Ⅳ系疫苗；

（3）16日龄抽检，心脏采血，进行白细胞分类计数、T淋巴细胞阳性率的测定、新城疫抗体效价测定和胸腺、法氏囊和脾脏免疫器官指数测定，作为免疫状态客观量化指标。

上述中药型肉鸡免疫抑制模型在评估免疫增强的药物或添加剂中的应用，包括以下步骤：

（1）将待评估药物或添加剂施用于所述肉鸡免疫抑制模型；

（2）观察候选药物或添加剂对肉鸡免疫抑制模型的白细胞总数、淋巴细胞数量、T淋巴细胞阳性率、免疫器官指数和新城疫疫苗免疫抗体效价的影响情况，

评估潜在的免疫增强药物或添加剂。

本发明的有益技术效果在于：