[发明专利]抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒

说明书

本发明属于医学及生物化学技术领域，具体是一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成，试剂R1包括：生物缓冲剂、促凝剂、表面活性剂、渗透压调节剂和水；试剂R2包括：包被抗环瓜氨酸肽抗原的乳胶颗粒、生物缓冲剂、封闭剂、防腐剂和水。该抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法来进行测定，相对于传统的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，具有快速灵敏、准确性好、特异性高、稳定性好等优点。

技术领域

本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体是一种测定抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的以累及周围关节为主的多系 统性炎症性的自身免疫病，发病两年内即可出现不可逆的骨关节破坏，并可引起多种并发症， 如神经系统疾病、心包炎、淋巴腺炎等。早期明确诊断及判断病情发展趋势有助于临床医生 应用改善病程药控制疾病，有效地减少关节侵蚀的发生。目前RA的诊断仍主要以临床表现、 X线及类风湿因子(rheumatoid factor，RF)等1987年美国风湿病协会修订的分类诊断为 依据，符合此标准的患者常已有关节破坏，加上RF缺乏特异性，不利于RA的早期诊断。近 年来陆续发现的抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)、抗Sa抗体、抗纤聚蛋白抗体(AFA) 都对RA有较高的特异性，并可在疾病的早期出现。进一步研究表明，其抗原位点是环胱氨酸 多肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)，该肽段是在肽基精氨酸脱亚胺酶的催化下， 由蛋白质中的精氨酸转化而成。2000年Schellekens等首次人工合成由21个氨基酸残基组 成的环瓜氨酸肽，建立酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测RA患者血清中的抗CCP抗体， 发现该抗体在RA诊断中具有很高的敏感型和特异性。抗环瓜氨酸多肽抗体的检测较APF和 AKA检测具有一定的优越性，因此抗环瓜氨酸多肽抗体的检测对RA的诊断具有重要意义。

目前，国外的抗CCP抗体对RA的检测已普遍用于临床，国内自2001年以来也逐步应用 于临床。文献显示，抗CCP抗体的特异性多在94％以上，敏感性为41％～87％。可见抗CCP抗体检测对RA的诊断具有较高的特异度，与目前通用的RA分类标准中唯一的血清学诊断指标RF(敏感性高但特异性差)相比，具有明显的优势。而且对供血员的连续检测表明，抗CCP抗体的检出可以比临床症状的出现提前数年，可见这一新的血清学诊断指标对RA的早期诊断 具有重要的意义，值得推广，以早期治疗患者，降低致残率。

目前国内外市场上的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒主要应用酶联免疫吸附法(ELISA法)， 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，其所生 成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比，可定性或定量检测患者血清中抗CCP抗体。 其特异性来自抗体或抗原的选择性，抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗 体的抗原结合位点之间，由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应 具有高度的特异性。ELISA法检测具有特异性高、价格低廉的优点，但是一般采用手工操作， 操作繁琐效率低，且人为影响因素大，结果只能定性或不精确地定量。因此，在这高效率的 自动化时代，特异性高、操作简便的全自动化检测方法必将有良好的市场前景。目前国内已 有体外诊断试剂公司开发出采用“胶乳增强免疫比浊法”检测的抗环瓜氨酸肽抗体试剂盒， 并已投入临床应用。

胶乳增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。 胶乳增强比浊法通过在高分子乳胶微球表面交联的单克隆抗体，而当抗原与交联有抗体的微 球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，改变反应溶液的吸光度。而且，反应液吸光度 的改变与被测抗原的浓度在一定范围内具有线性关系，可用来反映被测抗原的浓度。相对于 ELISA法，胶乳增强免疫比浊法操作简单，抗干扰性更强，且可测线性范围也更宽，能利用 普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用。