[发明专利]一种新型的猪轮状病毒疫苗的VP6抗原

说明书

技术领域

本发明属于抗原制备技术领域，具体涉及一种新型的猪轮状病毒疫苗的抗原，即一种氨基酸序列发生变异的猪轮状病毒VP6基因。

背景技术

猪轮状病毒(RV)引起猪腹泻及幼猪死亡,给养殖户带来巨大的经济损失。应用疫苗免疫已经成为降低相关发病率、病死率和减轻经济负担的一个重要途径。养猪场等动物养殖场是该病的其主要疫源地。目前临床主要应用减毒苗来进行防疫,但由于轮状病毒的多型性；以及减毒苗与野毒株基因重组,引起回复突变；养殖动物长期排毒,污染水源、食品；这些因素都给该病的防疫造成巨大困难。近年来国外深入开展了新型轮状病毒疫苗的研究工作,并取得了巨大进展。其中主要为基因工程疫苗的研究，通过基因工程方法表达轮状病毒的抗原，免疫动物或人，从而达到免疫保护的目的。基因工程疫苗主要包括核酸疫苗、合成肤疫苗、重组表达抗原疫苗以及轮状病毒类病毒颗粒(VLP)疫苗等。

但在目前使用的轮状病毒重组抗原亚单位疫苗研究中，由于轮状病毒基因组的多样性，导致制备的疫苗不能有效的预防不同基因背景的轮状病毒。且轮状病毒血清群和血清型众多,且不同毒株的生物学特性不同,故对轮状病毒的分离鉴定及相关特性的研究,无论是对该病毒的基础性研究亦或是对该病的应用性研究均具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于制备猪轮状病毒疫苗的抗原及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供猪轮状病毒VP6抗原基因，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2；

编码上述抗原的核苷酸片段，其一种序列为SEQ ID NO:1；

本发明提供一种表达上述抗原的方法，是将编码上述抗原的核苷酸片段连接到原核表达载体上，转化入大肠杆菌中，通过IPTG诱导表达。

本发明的VP6抗原可以用来制备单克隆抗体或多克隆抗体；

本发明的VP6抗原用于制备用于预防猪轮状病毒的疫苗。

本发明筛选获得了一个新型的猪轮状病毒VP6基因，利用pET28a(+)表达性载体构建了能表达猪轮状病毒VP6基因1的大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌。经SDS-PAGE分析，表达出了重组目的蛋白。将重组蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，对猪轮状病毒具有显著的免疫效果。

附图说明

图1:VP6扩增产物电泳图；

图2：本发明筛选的VP6的blastp的结果图；其中Query为本发明的VP6；

图3：VP6的重组表达产物SDS电泳图。

具体实施方式

首先对本发明所涉及的术语解释如下：

1、猪轮状病毒(RV)：

轮状病毒(Rotavirus，RV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)，轮状病毒属(Rotavirus)的成员。本属病毒略呈圆形，由11各双股RNA片断组成，有双层衣壳，直径65～75纳米。其中央为核酸构成的核心，内衣壳由32个呈放射状排列的圆柱形壳粒组成，外衣壳为连接于壳粒末端的光滑薄膜状结构，使该病毒形成车轮状外观，故命名为轮状病毒。各种动物和人的轮状病毒内衣壳具有共同的抗原，即群特异性抗原，可用补体结合、免疫荧光、免疫扩散和免疫电镜检查出来。轮状病毒可分为A、B、C、D、E、F等6个群，其中C群和E群主要感染猪，而A群和B群也可感染猪。

2、VP6抗原基因：VP6蛋白是RV病毒的特异性抗原，位于病毒的内壳，占病毒颗粒的51％。VP6蛋白主要刺激机体产生粘膜免疫抗体，在黏膜免疫中具有非常重要的作用。

3、基因工程重组亚单位疫苗：(Subunit vaccine)又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗，是指将保护性抗原基因在原核或真核细胞中表达，并以基因产物—蛋白质或多肽制成疫苗。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1：VP6基因的筛选及序列分析

近年来对猪轮状病毒(RV)的基因序列分析表明不同毒株的基因组序列之间存在差异，同时存在明显的“漂移”和“转变”现象，导致RV的多种血清型的存在。产生此现象的一个原因是当两个或以上的RV病毒同时侵袭一个宿主细胞时，基因片段之间相互作用，在转录复制过程中发生交换、交叉或重排，引起病毒的变异。因此，不同毒株间的节段重排和基因组内部的突变导致了突变株的产生。而突变株有一定的几率使已有的疫苗的免疫效果降低或完全没有效果。而通过血清交叉中和试验可以检测已有疫苗抗血清是否能有效中和筛选的突变株，从而确定筛选分离的毒株是否发生了变异。