[发明专利]一种采用培养法区分脲原体中解脲脲原体和微小脲原体的方法

说明书

本发明公开了一种采用培养法区分脲原体中解脲脲原体和微小脲原体的方法，确定两个检测微孔，分别记为甲孔和乙孔；甲孔内不加任何试剂，乙孔中加入锰镁溶液，经干燥，使锰、镁离子附着在乙孔内壁上；将待测样本加入脲原体培养基中，混合均匀后分别加入到甲孔和乙孔中，37℃培养24~48小时；根据甲孔和乙孔的变色情况确定样本中是否含解脲脲原体和微小脲原体。按照本发明方法制备成试剂盒更加方便使用。本发明的鉴定方法操作简单，一步即可精确区分标本中是否包含微小脲原体和解脲脲原体，同时该方法能与药敏检测结合在一起，同时做出鉴别和药敏结果；按照本发明方法原理制成的检测试剂盒，鉴定结果直观、精确，方便临床推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测技术，尤其是涉及一种采用培养法区分脲原体中解脲脲原体和微小脲原体的方法。

背景技术

脲原体（ Ureaplasma ）最早作为T株于1954年从人生殖道标本中分离，并于1974年被Shepard MC等人单独命名为一个新种--解脲脲原体（ Ureaplasma urealyticum ）。解脲脲原体分为两个生物群：Parvo 群和 T960 群，进一步可分为 14 个血清型，Parvo群由血清型1、2、6、14组成，，T960 群则包括2、4、5、7、8、9、10、11、12、13共十种血清型。这两群培养形成的菌落外观一致，划分生物群只能依据基因组之间的差异，需要使用核酸检测的方法。也有文献说划分生物群主要基于对锰的敏感性、多肽图谱和DNA-DNA 杂交实验百分率等差异。Kong F等从系统发育关系上首次指出解脲脲原体这两个生物群应该分别命名为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP) 和解脲脲原体（ Ureaplasma urealyticum，UU ）。2007年国际细菌学分类学会正式将解脲脲原体中Parvo 群分离作为一个新物种--微小脲原体( Ureaplasma parvum， UP)。

两种脲原体可以从临床标本中单独或同时分离，它们可以正常寄生在健康人的泌尿生殖道，也与一些侵入性的疾病有关，比如尿道炎（urethritis）、产后子宫内膜炎（postpartum endometritis）、绒毛膜羊膜炎（chorioamnionitis）、自然流产（spontaneousabortion）、早产（ premature birth）以及与早产儿相关的疾病诸如新生儿低体重（lowbirth weight）、肺炎（pneumonia）、菌血症（bacteremia）、脑膜炎（ meningitis）和新生儿呼吸系统综合征（neonatal respiratory disease ）。事实上，UU及UP与各种疾病是否有相关性的问题争议比较大，根源就在于二者的区分研究本世纪才开始，过去的研究资料都是在UP包括在UU内进行的。目前比较一致的意见是UU与非淋菌性尿道炎（non-gonorrhealurethritis, NGU）高度相关，而UP在男性尿道是正常菌群。临床生殖道标本中UP比UU更为常见，检出率远高于UU ，UP常见于临床无症状携带，多数人认为UP属于正常菌群。UP与疾患关系目前尚不明确，临床研究多集中在对新生儿的影响方面（1、宫内感染UP引起新生儿先天性肺炎； 2、在早产儿中，UP和UU呼吸道感染是导致支气管肺发育不良的重要危险因素，增加新生儿罹患支气管肺和持续动脉高压的风险及严重程度）。

正是由于UP与NGU无关，且人群携带率远高于UU，因此精确检测并鉴别出解脲脲原体UU就显得尤为必要。

目前检测脲原体的方法包括培养法、免疫学方法、分子生物学方法等：

培养法是基于脲原体具有脲酶分解尿素，可使培养基PH升高而变色，操作比较简单方便，一般24-48小时即可得出结果，并且还可以与药敏测定同时进行，但这种方法目前不能区分UU和UP，检测的是脲原体。虽然很多培养法的产品说是检测解脲脲原体（UU）,但其实检测的是脲原体，也就是将微小脲原体和解脲脲原体一起检测，并不能真正做到将二者进行区分，只是采用了解脲脲原体与微小脲原体分开前的名字--解脲脲原体。