[发明专利]芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1；克隆步骤：对芒果的总RNA进行提取和逆转录合成cDNA第一链；芒果的HMGR基因5′‑RACE和3′‑RACE扩增；芒果的HMGR基因全长cDNA扩增；PCR克隆产物的纯化与筛选；本发明方法首次获得芒果HMGR基因的cDNA序列全长，同时通过一种克隆芒果HMGR基因的引物组和克隆方法，它能快速准确地克隆芒果HMGR基因的编码序列，为后续芒果HMGR基因分子研究提供了理论基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法。

背景技术

芒果（Mangifera indica L.）为漆树科芒果属热带常绿果树，原产印度及马来西亚等地区，在我国主要集中分布于海南、广东、广西、云南等南方省区。近年来全球芒果年产量约2700万吨，已经成为世界许多地区的主要产业经济支柱，我国芒果产量一直位居世界前列，并呈现增长的趋势（李日旺等，2013）。芒果色、香、味俱佳，深受消费者青睐，其中香气这一品质特征越来越受到消费者以及品质育种学家的重视，因此香气成分成为评价芒果果实品质的重要指标之一（郭安，2006）。先前的研究发现，芒果果实中存在至少300多种香气成分，主要有单萜、倍半萜、醇类、酸类、酮类、酯类、酸类等，其中，萜类物质是芒果主要的风味物质，往往达到总挥发性香气物质的70%-90%左右，根据单萜与倍半萜的优势关系又分为单萜主导型和倍半萜主导型（张劲，2011；Jorge等，2005）。许多萜类被认为是通过甲羟戊酸途径（Mevalonate pathway，MVA pathway）合成的（马靓等，2006）。

3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A reductase, HMGR）属于MVA途径中的一个关键酶，催化HMG-CoA产生甲羟戊酸（mevalonic acid, MVA），这步反应是不可逆的，因此HMGR被认为是MVA途径中第一个重要的限速酶，也是MVA途径的重要调控点（Chappell等，1995）。研究表明，HMGR基因在很多植物中以基因家族的形式存在（Choi等，1992；Yang等，1991），目前在苹果、番茄、菠萝、荔枝等植物中克隆出该基因，但是在芒果中HMGR基因的研究至今还未发现有报道。因此，克隆芒果HMGR基因是相当有必要的，为后续深入研究芒果HMGR基因在果实成熟期间香气形成的特异性表达提供基础。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种芒果HMGR基因、用于克隆芒果HMGR基因的引物及其克隆方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

芒果HMGR基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。

进一步说明，所述芒果HMGR基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

进一步说明，所述芒果HMGR基因的克隆引物组引物序列如下：

HMGR-F：5′-aatgccgtcttcttcaccgtcttc-3′，

HMGR-R：5′-ttccttgatgctgctgcctacttg-3′；

UPM：5′-ctaatacgactcactatagggcaagcagtggtatcaacgcagagt-3′；