[发明专利]一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法

权利要求书

1.一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）种子液的制备；将出芽短梗霉菌株活化2~3h，然后用无菌生理盐水洗下斜面菌株的孢子，制备孢子悬液，按照10%的接种量将孢子悬液转接到含有种子培养基中进行培养，培养温度25℃，摇床转速为200r/min，培养时间为40h，制得种子液；

（2）发酵罐发酵：将所得种子液以10%的量接于发酵培养基中进行发酵培养，初始转速300r/min，通风量2.5-3V·V·m，罐压在0.1MPa，温度为25-28℃；在发酵时间至90h-108h放出45%体积的发酵液，记作第一批发酵液；同时往发酵罐中补充与放料体积相同的发酵培养基后，调节PH为6.0-7.0；继续发酵98-100h后，再放出50%发酵液，该批发酵液记为第二批发酵液，同时往发酵罐中补充与放料体积相同的发酵培养基后，调节PH为6.0-7.0；继续发酵96-108h后停止发酵，终产发酵液记为第三批发酵液；

（3）提取：将上述的三批发酵液分别提取后，干燥，分别得到三种分子量不同的聚苹果酸。

2.根据权利要求1所述的一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征在于，所述发酵培养基组分为：蔗糖 150-180g/L，蛋白胨 30-35g/L，KH₂PO₄ 0.08-0.1g/L，NaNO₃1.8-2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2-0.3g/L，KCl 0.3-0.5g/L，MnSO₄ 0.03-0.05g/L，余量为水。

3.根据权利要求1所述的一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征在于，所述种子培养基组成为：蔗糖 140g/L，酵母膏 3g/L，硫酸铵 1g/L，丁二酸 2g/L，玉米浆 0.1v/v，K₂CO₃ 0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1g/L，KH₂PO₄ 1g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.05g/L，余量为水。

4.根据权利要求1所述的一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征在于，发酵液的提纯方法为：发酵液离心除菌体后，加入4倍体积的无水甲醇，搅拌离心去除上清后，再使用蒸馏水冲洗2遍，沉淀烘干即为聚苹果酸。

5.根据权利要求1所述的一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征在于，接种口在火焰保护下进行接种操作。