[发明专利]利用红和远红荧光染料在细胞级表征生物组织

说明书

在至少一个方面，本文公开的实施例涉及观察生物组织形态的方法，其包括：在所述生物组织上使用荧光染料，其中所述荧光染料选自专利蓝V、异硫蓝、甲苯胺蓝、金丝桃素、吲哚氰绿、MVAC、或亚德里亚霉素；使用显微线性或非线性成像系统来形成所述生物组织的图像，其中所述染料的荧光在细胞级揭示了所述组织的形态。

相关申请的交互参考

本申请是2014年11月17日进入中国国家阶段、申请号为201380025844.5、发明名称为“利用红和远红荧光染料在细胞级表征生物组织”的发明专利申请的分案申请。

背景技术

口腔癌(包括嘴唇、舌部、咽喉和口腔)在所有的癌症形式中排列第12位。尽管原发恶性肿瘤当前在治疗上有所进展，但由于其确诊时通常已是晚期，因而仍然是一种预后不佳的癌症。白光检查和触诊通常用于定位活体检视部位。在进行了放射性胶体和蓝色染料的间质注射后，术中淋巴造影已被确认和广泛接受为常规的手术程序，其主要用于乳腺癌、皮肤黑色素瘤以及较小范围的头颈癌。

已引入光学诊断方法来改善对癌症前期及癌性损害与正常组织之间的鉴别，以及用来检测前哨淋巴结(Rasmussen J.C.et al.,Lymphatic imaging in humans withnear-infrared fluorescence,Curr Opin Biotechno 2009；20:74-822009，以及Varghese P.et al.,Methylene Blue Dye-A Safe and Effective Alternative forSentinel Lymph Node Localization,The Breast J 2008；14:61-7)。已利用来自内源性和外源性诱导荧光团的宏观(或称可目视)荧光成像，或利用诸如喇曼光谱学、荧光光谱学和弹性散射光谱学等的分光镜分析法进行临床研究。共焦显微术长时间局限于基础研究，但是近年来已用于可疑组织细胞级的体内成像(Kiesslich R.et al.,Confocal laserendoscopy for diagnosing intraepithelial neoplasias and colorectal cancer invivo,Gastroenterology 2004；127:706-13)。为了满足对高分辨率成像的需要，过去几年已广泛使用基于探头的共焦激光显微内镜(pCLE)。这样的非侵入式方案被称为“光学活体检视”，其使得利用荧光染料来评定和监视各种器官中的癌症及其他疾病成为可能。

金丝桃素，一种羟基化二苯基二萘嵌苯喹啉(phenantroperylenequinone)，已被考虑用来进行荧光诊断。已评价了这种染料在异常细胞特别是癌性细胞中较高的上染率对于提高膀胱癌检出率(D'Hallewin M-A.et al.,Hypericin-based fluorescencediagnosis of bladder carcinoma,BJU International 2002；89:760-3)和恶性口腔损害检出率(Thong P.S.P.et al.,Clinical application of fluorescence endoscopicimaging using hypericin for the diagnosis of human oral cavity lesions,Br JCancer 2009；101:1580-4)的可能性。在后来的研究中，诊断标准是基于红蓝强度比，在非恶性损害中的红蓝强度比大于恶性损害中的红蓝强度比。

甲苯胺蓝，一种来自噻嗪族的公知异染性染料，现已研究了其在口腔宽场检查中的可能性，通过某种局部施用对恶性和恶变前的损害进行染色：根据爱泼斯坦(Epstein)所述，利用这种处理方法，具有较高风险发展成癌症的恶变前损害会被优先着色。利用这种活体染料进行宏观检查时，主要的假阳性结果通常与炎症或创伤区域有关。因此，为了消除这些因素，强烈推荐在两星期后进行复查(Epstein J.B.et al.,2009)。一种现有的元分析法被用来评价甲苯胺蓝在口腔癌筛查中的有效性。结果表明，在高风险人群中，该方案的灵敏度范围在93.5％至97.5％之间，特异性范围在73.3％至92.9％之间。