[发明专利]一种磷脂酶A1辅助蛋白PlaS的表达及纯化方法在审
| 申请号： | 201711137213.9 | 申请日： | 2017-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN108004261A | 公开（公告）日： | 2018-05-08 |
| 发明（设计）人： | 薛正莲;朱昊;王洲;刘艳;陈阿娜;杨蒙;甘玉飞 | 申请（专利权）人： | 安徽工程大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/00;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京东方灵盾知识产权代理有限公司 11506 | 代理人： | 苏向银 |
| 地址： | 24100*** | 国省代码： | 安徽;34 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 磷脂酶 a1 辅助 蛋白 plas 表达 纯化 方法 | ||
1.一种磷脂酶A1辅助蛋白PlaS的表达方法，其特征在于：将磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因N端去除信号肽，得到截短辅助蛋白，然后构建大肠杆菌/截短辅助蛋白表达菌株，将表达菌株接种至培养基中进行目的蛋白诱导表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述进行目的蛋白诱导表达是将表达菌株接种至含有TB的培养基或乳糖自诱导培养基中进行培养。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述含有TB的培养基为TB培养基、TB培养基+0.98wt％甘油+0.75wt％甘氨酸或TB培养基+1-3wt％甘油。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述含有TB的培养基为TB培养基+3wt％甘油。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：在目的蛋白诱导表达后，制备破碎上清蛋白。
6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：所述截短辅助蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.4。
7.一种磷脂酶A1辅助蛋白PlaS的纯化方法，其特征在于：应用权利要求1-6任一项表达方法将磷脂酶A1辅助蛋白PlaS进行表达，然后纯化。
8.根据权利要求7所述的纯化方法，其特征在于：所述纯化为用磁珠纯化或用AKTA系统过镍柱纯化。
9.根据权利要求8所述的纯化方法，其特征在于：所述纯化为用AKTA系统过镍柱纯化。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述用AKTA系统过镍柱纯化时结合缓冲液配方为：20mM磷酸钠，0.5M NaCl，20mM咪唑，pH 7.4；洗脱缓冲液配方为20mM磷酸钠，0.5MNaCl，500mM咪唑，pH 7.4。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于安徽工程大学，未经安徽工程大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711137213.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
