[发明专利]生物酶解法制备的天然抗菌肽

说明书

本发明公开了生物酶解法制备的天然抗菌肽，抗菌肽具有>30KD、10‑30KD、3‑10KD、<3KD四个分子段，各自具有不同的抑菌作用，可以用于蔬果保鲜、灭菌消毒等，制备天然抗菌肽的生物酶解法，包括：预处理、碱解、酸解、纯化，鱼鳞先后经氢氧化钠溶液、柠檬酸溶液除杂后制得鱼鳞蛋白，然后依次通过碱性蛋白酶、酸性蛋白酶水解，最后经抽滤、超滤制得天然抗菌肽。有益效果为：碱解过程中加入的（2R，4R）‑戊二醇对碱性蛋白酶与酸性蛋白酶具有络合作用，作用于其活性中心，进而对蛋白酶具有较强的激活作用，提高蛋白酶的酶解活性，提高酶解效率，降低时间成本。

技术领域

本发明涉及天然抗菌肽领域，尤其是涉及生物酶解法制备的天然抗菌肽。

技术背景

抗菌肽原指昆虫体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质，分子量在2000-7000左右，由20-60个氨基酸残基组成。这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。世界上第一个被发现的抗菌肽的是1980年由瑞典科学家G.Boman等人经注射阴沟通杆菌及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹产生的具有抗菌活性的多肽，定名为Cecropins。

最初，人们在研究北美天蚕的免疫机制时，发现其滞育蛹经外界刺激诱导后，其血淋巴中产生了具有抑菌作用的多肽物质，这类抗菌多肽被命名为天蚕素(Cecropins)。后来，从其他昆虫以及两栖类动物、哺乳动物中，也分离到结构相似的抗菌多肽，有70多种抗菌多肽的结构被测定。1980年后的数年间，人们相继从细菌、真菌、两栖类、昆虫、高等植物、哺乳动物乃至人类中发现并分离获得具有抗菌活性的多肽。由于这类活性多肽对细菌具有广谱高效杀菌活性，因而命名为“antibacterial pepitides，ABP”，中文译为抗菌肽，其原意为抗细菌肽。随着人们研究工作的深入开展，发现某些抗细菌肽对部分真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强有力的杀伤作用。

关于抗菌肽的制备技术有很多方法，现有技术如授权公众号为CN 101250572 B的中国发明专利，公开了一种提取猪血抗菌肽的方法，该发明方法以木瓜蛋白酶对猪血进行酶解，然后加入氯仿与亚硫酸氢钠进行脱色，最后经凝胶型阳离子交换柱纯化猪血抗菌肽，具有有操作简单、分离提取率高、成本低的优点，但是该发明方法中仅仅是使用一种木瓜蛋白酶对猪血进行酶解，其抗菌肽的提取效率较低，而在酶解液中加入了氯仿与亚硫酸氢钠增加了对抗菌肽的提纯工艺难度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用生物酶解法制备的天然抗菌肽，天然抗菌肽具有较强的抑菌作用，酶解方法简单易行，适合规模化生产。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：生物酶解法制备的天然抗菌肽，抗菌肽具有&gt;30KD、10-30KD、3-10KD、&lt;3KD四个分子段，各自具有不同的抑菌作用，可以用于蔬果保鲜、灭菌消毒等，具有较好的市场前景，制备天然抗菌肽的酶解方法简单易操作，投入成本较低，适合工业化生产。

生物酶解法制备天然抗菌肽，包括：预处理、碱解、酸解、纯化，具体包括以下步骤：

预处理：取15-20份清洗风干后的鱼鳞于5-6倍的4-5%氢氧化钠溶液中，浸泡15-25分钟；用清水清洗鱼鳞至中性后，于100-120份蒸馏水中磁力搅拌30-45分钟，蒸馏水清洗至无悬浮物存在；再用100-120份10-15%的柠檬酸溶液浸泡过夜，取出用蒸馏水清洗至中性，低温干燥并粉碎后过120-160目筛保存备用；在除去鱼鳞上油脂的同时使鱼鳞膨胀，蒸馏水浸提可以除去杂质，经酸沉后得到较为纯净的鱼鳞蛋白，处理方法较为简单，易于操作；