[发明专利]一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒。

背景技术

降钙素原是降钙素的前体物，具有116个氨基酸糖蛋白，在人体内的半衰期约为20-24小时，稳定性好，降钙素原在正常人血清中含量极低，在系统炎症反应综合症(SIRS)、败血症、急慢性肺炎、急性胰腺炎、活动性肝炎、创伤等患者血清中显著升高，而在病素毒感染时则保持低水平，降钙素原在严重细菌感染(2-3小时后)早期即可升高，因此具有早期诊断价值。在局部感染、病毒感染、慢性非特异性炎症、移植物宿主排斥反应或自身免疫性等疾病时降钙素原的浓度不增加或轻微增加，而只在严重的全身系统性感染时才明显增加，这就决定了降钙素原的高度特异性，因此也可用于各种临床情况的鉴别诊断。降钙素原的浓度和炎症严重程度成正相关，并随着炎症的控制和病情的缓解而降低至正常水平，因而降钙素原又可作为判断病情与预后以及疗效观察的可靠指标。

降钙素原的检测方法有放射免疫学分析法、双抗夹心免疫化学法、胶体金比色法和免疫比浊法。放射免疫学分析法耗时长(19-22h)，而且有放射性元素的污染导致其使用受到限制。胶体金比色法有快速简便，易观察的特点，但只能进行定性或半定量检测，灵敏度低。双抗夹心免疫化学法操作简便，特异性强，但灵敏度较低。

降钙素原免疫比浊法检测试剂盒具有高精密度和强特异性的特点，可以实现大批量自动化检测，但是同样存在稳定性和灵敏度不足的缺点，不利于临床应用推广。

发明内容

针对降钙素原免疫比浊法检测试剂盒应用中存在的问题，本发明提供一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒，较常规检测试剂盒稳定性较好和线性范围大，分析灵敏度高，有利于试剂的推广应用。

本发明采用的方案如下：

一种降钙素原免疫比浊法检测试剂盒，包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1的组成为：40mmol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液，0.1mmol/L聚乙二醇6000，0.1mmol/L氯化钠，1.5mmol/L叠氮钠。

试剂R2的组成为：0.1％-2％降钙素原抗体乳胶颗粒，0.1mmol/L氯化钠、1.5mmol/L叠氮钠、40mmol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液、20-40g/L牛血清白蛋白。

上述的乳胶颗粒采用20-50nm纳米颗粒与6mL/L的羊抗人抗体偶联形成的偶联物。

上述试剂R1、试剂R2使用时体积比为R1：R2＝3：1。

降钙素原抗体乳胶颗粒制备方法为：20-50nm纳米胶乳颗粒在N-羟基琥珀酰亚胺和EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)作用下形成活性酯，再与6mL/L的羊抗人PCT抗体反应，形成共价键，完成偶联，形成降钙素原抗体乳胶颗粒。

本发明的试剂盒在全自动生化分析仪中进行，具体的使用方法如下：

加入20ul的样本、校准品或生理盐水后加入240ul的试剂R1孵育5min后加入80ul试剂R2混匀延迟1min后读取吸光度A1，5分钟后读取吸光度A2，计算ΔA。

本发明的有益效果包括：

本发明试剂盒的分析灵敏度高于现有产品，通过提前对抗体乳胶颗粒的处理提高抗体和纳米颗粒结合稳定性，减少游离抗体与降钙素原的反应，增强反应的灵敏度，同时加入牛血清白蛋白和叠氮钠提高试剂的稳定性，较少各类细菌物质的形成，有利于试剂的保存。

附图说明

图1为实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图；

图2为实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图；

图3为实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性示意图。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合具体的实施例进行说明。

实施例1(对照例)

一种市场上面常规的降钙素原免疫比浊法检测试剂盒，包含试剂1、试剂2和校准品

试剂1：

磷酸盐缓冲液 40mmol/L

聚乙二醇 0.1mmol/L；

试剂2：

降钙素原抗体 6mL/L

磷酸盐缓冲液 40mmol/L。

本实施例描述的降钙素原免疫比浊法检测试剂盒，采用迪瑞CS-600B全自动生化分析仪进行测定，具体操作如下：