[发明专利]一种同步检测5种动物源性成分的多重PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同步检测5种动物源性成分的多重PCR方法，其特征在于该方法包括如下步骤

(1)提取待检动物组织的DNA，并对其进行多重PCR扩增，PCR反应体系为：5×PCR Buffer 10μL，dNTP Mix 0.2mmol/L，Taq DNA聚合酶2.5U，MgCl₂ 2mmol/L，引物配比为牛：羊：鸡：猪：鸭＝2:1:1:1:0.5，用dd H₂O补足体系至50μL。最终反应体系中牛、羊、鸡、猪和鸭的正、反引物浓度分别为1mmol/L，0.5mmol/L，0.5mmol/L，0.5mmol/L和0.25mmol/L。多重PCR反应程序如下：94℃预变性5min；94℃变性40s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min；

(2)对多重PCR的产物进行凝胶电泳分析，根据PCR产物条带大小和有无判定样品中是否含有5种动物源性成分，其中牛、羊、鸡、猪和鸭扩增后所获目的条带大小分别为：493bp、302bp、400bp、277bp、239bp；

其中所述的引物为：

牛：上游引物：SEQ NO.1 5′-tagcaattgccatagtccac c-3′

下游引物：SEQ NO.2 5′-taggatgaggagaaagtataggaca-3′；

羊：上游引物：SEQ NO.3 5′-cgccatagttcacctactct tc-3′

下游引物：SEQ NO.4 5′-ttactaggactaggattgag aggat-3′；

鸡：上游引物：SEQ NO.5 5′-cttccttcacatcggacgag-3′

下游引物：SEQ NO.6 5′-gggtgagtatgagagttaag cc-3′；

猪：上游引物：SEQ NO.7 5′-aatttttggggatgcttaga ct-3′

下游引物：SEQ NO.8 5′-tattttgggaggttattgtg ttgta-3′；

鸭：上游引物：SEQ NO.9 5′-cgaggcttctactacggc-3′

下游引物：SEQ NO.10 5′-gggtgattcctgcgatta-3′。

2.一种同步检测5种动物源性成分的试剂盒，其特征在于该试剂盒含有如下内容：

PCR A液：PCR Buffer、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、MgCl₂、五对引物及蒸馏水；

PCR B液：含有阳性DNA模板，包括牛、羊、鸡、猪、鸭的基因组DNA；

使用说明书；

其中所述的五对引物为：

牛：上游引物：SEQ NO.1 5′-tagcaattgccatagtccac c-3′

下游引物：SEQ NO.2 5′-taggatgaggagaaagtataggaca-3′；

羊：上游引物：SEQ NO.3 5′-cgccatagttcacctactct tc-3′

下游引物：SEQ NO.4 5′-ttactaggactaggattgag aggat-3′；

鸡：上游引物：SEQ NO.5 5′-cttccttcacatcggacgag-3′

下游引物：SEQ NO.6 5′-gggtgagtatgagagttaag cc-3′；

猪：上游引物：SEQ NO.7 5′-aatttttggggatgcttaga ct-3′

下游引物：SEQ NO.8 5′-tattttgggaggttattgtg ttgta-3′；

鸭：上游引物：SEQ NO.9 5′-cgaggcttctactacggc-3′

下游引物：SEQ NO.10 5′-gggtgattcctgcgatta-3′。