[发明专利]一种基于多克隆抗体的免疫比浊法测定载脂蛋白用的R2试剂及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及载脂蛋白测定技术领域，具体地说涉及一种基于多克隆抗体的免疫比浊法测定载脂蛋白用的R2试剂及试剂盒。

背景技术

载脂蛋白是血浆中脂蛋白的组成成分，主要分A、B、C、D、E五类，基本功能是运载脂类物质及稳定脂蛋白的结构，某些载脂蛋白还有激活脂蛋白代谢酶、识别受体等功能。载脂蛋白对脂蛋白的结构、功能和代谢至关重要，为诊断脂质代谢疾病提供有价值的指标。

目前测定载脂蛋白的方法主要有荧光免疫测定法、酶免疫分析法、酶联免疫法以及免疫比浊法，少量使用单克隆抗体ELISA夹心法。其中，荧光免疫测定法较酶免疫分析法检测线性范围宽，精密度好，但需专门的检测仪器，检测成本较高；酶联免疫法灵敏度高，但是操作繁琐，用时较长，难以用于大规模自动化检测；ELISA法检测灵敏度较高，但是仪器价格较高，也不适用于全自动检测。

而免疫比浊法因其灵敏度高，检测线性范围宽，且操作简便，易操作，自动化程度高，可用于全自动生化分析仪的优点，成为临床测定首选方法，与其他方法检测试剂比较，通用性较强。免疫比浊法应用原理是标本中的载脂蛋白特异地与羊抗人抗体反应，形成不溶性的复合物，引起浊度增加，可根据该不溶性复合物的浊度测定出样本中载脂蛋白的浓度。

免疫比浊法可以使用单克隆抗体或多克隆抗体，使用单克隆抗体，虽然杂蛋白较少，试剂能长期保存，但价格昂贵，因此，目前市场上载脂蛋白测定试剂盒(免疫比浊法)大都采用多克隆抗体，多克隆抗体虽然价格便宜，但是由于现在上游原料载脂蛋白多克隆抗体纯化技术不够成熟，导致获取不到较为纯净的多克隆抗体，杂蛋白较多，免疫试剂在杂蛋白过多的情况下，会加速试剂的变质，不利试剂长期保存。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于多克隆抗体的免疫比浊法测定载脂蛋白用的R2试剂及试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种基于多克隆抗体的免疫比浊法测定载脂蛋白用的R2试剂，按以下方法制备而成：将TRIS加入到水中，调节pH至7.4～7.5，然后加入NaCl、EDTA-Na2、聚乙二醇6000、载脂蛋白多克隆抗体、PC300，加水定容，得到初配液，然后对初配液进行密封静置处理，再对经过密封静置处理的初配液进行去除固体杂质处理，得到所述基于多克隆抗体的免疫比浊法测定载脂蛋白用的R2试剂。

进一步地，初配液中，各原料的含量为：TRIS 20～100mmol/L、NaCl 6.5～9.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～40g/L、载脂蛋白多克隆抗体80～200ml/L、PC300 0.9～1ml/L。

进一步地，密封静置处理的环境温度为2～8℃，时间为10～15d。在实施本发明的过程中，发明人发现，本发明的R2试剂在2～8℃密封状态下最适长期保存，因刚配制成的初配液含有大量的杂蛋白，静置10～15d可使体积较大的杂蛋白能更好地在聚乙二醇6000促聚下形成沉淀，有利于下一步过滤，不易堵塞过滤膜。

进一步地，去除固体杂质处理的具体步骤为：对经过密封静置处理的初配液进行初次抽滤，得到初滤液，对初滤液进行离心处理，取上清液，最后对上清液进行二次抽滤。在实施本发明的过程中，发明人发现，使用这种方法能够过滤掉体积较小的杂蛋白，且在过滤的过程中不易堵塞过滤膜，在工艺上更具有可操作性。

进一步地，所述R2试剂用于测定载脂蛋白A2，所述载脂蛋白多克隆抗体为载脂蛋白A2多克隆抗体，初配液中，各原料的含量为：TRIS 50～100mmol/L、NaCl 6.5～8.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～30g/L、载脂蛋白多克隆抗体120～180ml/L、PC300 0.9～1ml/L。在实施本发明的过程中，发明人发现，用于测定载脂蛋白A2时，各原料的含量具体选择在上述范围，试剂的保存时间更长，而且检测准确性也较好。

进一步地，所述R2试剂用于测定载脂蛋白C2，所述载脂蛋白多克隆抗体为载脂蛋白C2多克隆抗体，初配液中，各原料的含量为：TRIS 20～50mmol/L、NaCl 6.5～8.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～40g/L、载脂蛋白多克隆抗体80～120ml/L、PC300 0.9～1ml/L。在实施本发明的过程中，发明人发现，用于测定载脂蛋白C2时，各原料的含量具体选择在上述范围，试剂的保存时间更长，而且检测准确性也较好。